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甘草黄酮与绞股蓝皂苷对花生四烯酸通路的影响

作　者: 齐彩芝
导　师: 徐暾海；李沧海
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中医学
关键词: 单核巨噬细胞甘草黄酮花生四烯酸环加氧酶绞股蓝皂苷磷脂酶A2 内毒素细胞色素P450 前列腺素E2
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

甘草是中医临床应用最常用的中药,绞股蓝是近代发现而日益受到重视的中药,前者所含皂苷类和后者所含黄酮均系两者的主要活性成分,近来发现它们均具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等药理作用。花生四烯酸代谢产物广泛参与了上述病理过程,甘草黄酮和绞股蓝皂苷是否通过干预花生四烯酸代谢通路而表现上述药理作用,其作用机理如何?本文采用细菌脂多糖刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.7构建研究系统,分别观察了部分工具药和甘草黄酮、绞股蓝皂苷对该通路的影响,期望和脂质组学技术得到的结果相互印证。主要研究结果如下：(1)LPS可以显著诱导RAW 264.7细胞磷脂酶A2(PLA2)表达升高,阿司匹林(COX抑制剂)和木犀草素(15-脂氧合酶抑制剂)显示明显拮抗作用(P<0.05)。而其他工具药如TMS(CYP450选择性抑制剂)、咖啡酸(LOX抑制剂)、Thio-PC (sPLA2选择性抑制剂)、CAYl0397(15-PGDH选择性抑制剂)、黄芩素(12-LOX特异性抑制剂)、Bestatin(LTA4水解酶抑制剂)、SC-560 (COX-1选择性抑制剂)以及甘草黄酮和绞股蓝皂苷对PLA2含量影响与LPS组相比,不具统计学显著性(P>0.05)。但显示这样的趋势：1mg/mL与0.5mg/mL的甘草黄酮可以抑制PLA2的活性,0.25mg/mL的甘草黄酮可以促进PLA2的活性。(2)LPS处理促使RAW264.7细胞COX-2表达升高,阿司匹林(COX抑制剂)小剂量、咖啡酸小剂量、CAY10397小剂量、SC-560及Thio-PC小剂量均显示拮抗COX-2表达量升高(P<0.05),其他工具药物组虽然也都有不同程度的拮抗作用,但和LPS组相比差异不具显著性意义(P>0.05)；绞股蓝皂苷和甘草黄酮均可抑制LPS诱导的COX-2表达升高。(3)LPS刺激下,RAW264.7细胞表达P450上调,除TMS (CYP450选择性抑制剂)拮抗该作用外(P<0.05),其它试药在该实验条件下未取得具有统计学意义的阳性结果(P>0.05)。(4)在本实验条件下,所试工具药(阿司匹林、SC-560、Bestatin、Thio-PC、CAY10397等)均显示可以抑制LPS刺激的PGE2释放增加(P<0.05),不同浓度的甘草黄酮及绞股蓝皂苷也显示类似结果(P<0.05)。上述结果显示,甘草黄酮及绞股蓝皂苷可能通过抑制环加氧酶等PGE2释放,而与PLA2和PGs灭活酶等无关。

全文目录

目录  4-6
英文缩略词  6-7
中文摘要  7-8
Abstract  8-9
前言  9-11
第一章文献综述  11-19
  1.1 花生四烯酸及其代谢物  11-12
  1.2 花生四烯酸代谢通路  12-18
    1.2.1 花生四烯酸上游代谢通路  13
    1.2.2 脂氧合酶(LOX)通路  13-14
    1.2.3 环加氧酶(COX)通路  14-17
    1.2.4 细胞色素P450酶(CYP450)通路  17-18
  1.3 受试药物选择  18-19
第二章材料和方法  19-28
  2.1 实验材料  19-22
  2.2 RAW264.7细胞的培养  22-23
    2.2.1 细胞株系  22
    2.2.2 细胞的培养和传代  22-23
      2.2.2.1 细胞培养  22
      2.2.2.2 细胞传代  22-23
      2.2.2.3 细胞冻存  23
      2.2.2.4 细胞复苏  23
  2.3 工具药干预实验  23-24
  2.4 酶活性测定  24-26
    2.4.1 样品前处理  24-25
    2.4.2 ELISA试剂盒测定酶活性  25-26
  2.5 PGE_2含量测定  26-27
    2.5.1 样品前处理  26
    2.5.2 ELISA试剂盒测定PGE_2含量  26-27
  2.6 统计  27-28
第三章结果  28-38
  3.1 试药对LPS刺激RAW264.7细胞PLA_2表达升高的影响  28-30
  3.2 试药对LPS刺激RAW264.7细胞COX-2表达升高的影响  30-32
  3.3 试药对LPS刺激RAW264.7细胞CYP450表达的影响  32-34
  3.4 试药对LPS刺激RAW264.7细胞PGE_2释放的影响  34-38
第四章讨论  38-40
参考文献  40-43
致谢  43-44
个人简历  44-45

甘草黄酮与绞股蓝皂苷对花生四烯酸通路的影响

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