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复方蜂胶纳米乳佐剂的研制

作　者: 张旭
导　师: 欧阳五庆
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 生理学
关键词: 蜂胶黄芪多糖纳米乳佐剂
分类号: S859.79
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本研究将蜂胶和黄芪多糖复配,以纳米乳为载体,制备出一种复方蜂胶纳米乳佐剂,目的在于改良常规油佐剂存在的问题。通过对该新型佐剂稳定性、安全性和免疫效力考察,为该佐剂在预防兽医中的应用提供理论依据。第一部分:复方蜂胶纳米乳佐剂的制备及其质量评价。利用伪三元相图法筛选处方,以RH-40、无水乙醇、乙酸乙酯、蜂胶和黄芪多糖为原料制备了复方蜂胶纳米乳,并对其结构类型、形态粒径、黏度、稳定性进行考察。结果表明:复方蜂胶纳米乳透射电镜下呈球形,平均粒径为12.70 nm,PDI为0.188,粒径分布均匀;黏度为2s·0.4 mL-1;该制剂体系稳定。复方蜂胶纳米乳佐剂制备工艺简单、稳定性好、黏度低,符合生物制品质量检验的要求。第二部分:复方蜂胶纳米乳佐剂的安全性评价。本研究采用急性经口毒性试验、急性眼刺激试验、肌肉刺激性试验、热原试验和细胞毒性试验考察了复方蜂胶纳米乳佐剂的安全性。结果表明:复方蜂胶纳米乳佐剂LD50>5000 mg/kg,属实际无毒;复方蜂胶纳米乳佐剂对眼和肌肉均无刺激性;热原试验表明,复方蜂胶纳米乳佐剂符合规定;复方蜂胶纳米乳佐剂稀释100倍以上无细胞毒性。复方蜂胶纳米乳佐剂安全性高,对活体无刺激,符合生物制品安全检验的要求。第三部分:复方蜂胶纳米乳佐剂灭活苗的制备及攻毒保护试验。本研究制备出复方蜂胶纳米乳佐剂-H9亚型禽流感病毒灭活苗,并对该疫苗进行了质量和安全性评价,同时进行了攻毒保护试验。结果表明,该灭活疫苗的制备采用直接配苗法,简单易操作;质量评价结果显示,蜂胶外观澄清透明,结构类型为O/W型;高速离心试验5000r/min,离心30min,无破乳现象发生;黏度测定2.5s·0.4 mL-1;无菌检验符合规定;安全检验结果显示,抗原灭活彻底,无血凝活性,疫苗接种鸡只无不良反应;攻毒保护率100%。新型禽流感灭活疫苗物理性状稳定、黏度适宜注射、安全可靠,为该佐剂在生产实践中的应用提供可靠依据。第四部分:复方蜂胶纳米乳佐剂的免疫效力研究。本章在前期工作基础上,通过HA-HI和MTT淋巴细胞转化试验考察复方蜂胶纳米乳佐剂-H9亚型禽流感灭活苗的体液免疫水平和细胞免疫水平。结果显示:当佐剂中蜂胶浓度达到15mg/mL时,复方蜂胶纳米乳佐剂疫苗免疫效果显著,能够诱导较高的抗体水平,并能有效激活机体的细胞免疫应答;与白油疫苗组相比,该新型疫苗免疫后产生抗体时间更早、滴度更高;淋转试验结果显示,复方蜂胶纳米乳佐剂灭活苗细胞免疫产生迅速,细胞免疫水平高于白油疫苗组、抗原对照组。由此可见,复方蜂胶纳米乳佐剂具有广阔的开发前景。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-12
第一章文献综述  12-22
  1.1 佐剂的研究进展  12-16
    1.1.1 佐剂的分类  12
    1.1.2 佐剂的作用机制  12-13
    1.1.3 新型佐剂的研究进展  13-16
  1.2 蜂胶的免疫学研究  16-17
    1.2.1 蜂胶的免疫增强作用  16-17
    1.2.2 蜂胶佐剂的开发和应用  17
    1.2.3 蜂胶疫苗的免疫学机制  17
  1.3 黄芪多糖的免疫学研究  17-19
    1.3.1 黄芪多糖的免疫增强作用  17-18
    1.3.2 黄芪多糖的免疫药理作用  18-19
  1.4 纳米佐剂的研究进展  19-20
    1.4.1 纳米技术在医药领域的研究  19
    1.4.2 纳米佐剂的免疫学研究  19-20
  1.5 本研究的目的与意义  20-21
  1.6 本研究的主要内容  21-22
第二章复方蜂胶纳米乳佐剂的制备及质量评价  22-31
  2.1 材料  22-23
    2.1.1 主要试剂  22
    2.1.2 主要仪器  22-23
  2.2 方法  23-24
    2.2.1 P-APS-NE 的制备  23
    2.2.2 P-APS-NE 质量评价  23-24
  2.3 结果  24-30
    2.3.1 P-APS-NE 的制备  24-27
    2.3.2 P-APS-NE 质量评价  27-30
  2.4 讨论  30
  2.5 小结  30-31
第三章复方蜂胶纳米乳佐剂的安全性评价  31-40
  3.1 材料  31-32
    3.1.1 主要试剂  31
    3.1.2 试验动物和细胞株  31
    3.1.3 主要仪器  31-32
  3.2 方法  32-34
    3.2.1 急性经口毒性试验  32
    3.2.2 急性眼刺激性试验  32-33
    3.2.3 肌肉刺激性试验  33
    3.2.4 热原试验  33
    3.2.5 细胞毒性试验  33-34
  3.3 结果  34-38
    3.3.1 急性经口毒性试验  34
    3.3.2 急性眼刺激性试验  34-35
    3.3.3 肌肉刺激性试验  35
    3.3.4 热原试验  35
    3.3.5 细胞毒性试验  35-38
  3.4 讨论  38-39
  3.5 小结  39-40
第四章复方蜂胶纳米乳佐剂灭活苗的制备及攻毒保护试验  40-46
  4.1 材料  40
    4.1.1 毒株  40
    4.1.2 主要试剂  40
    4.1.3 试验动物  40
    4.1.4 主要仪器  40
  4.2 方法  40-43
    4.2.1 疫苗用蜂胶的质量标准  40-41
    4.2.2 AIV-H9N2 复方蜂胶纳米佐剂疫苗的制备  41-42
    4.2.3 AIV-H9N2 复方蜂胶纳米佐剂疫苗质量评价  42
    4.2.4 AIV-H9N2 复方蜂胶纳米佐剂疫苗的安全性检验  42-43
    4.2.5 攻毒保护试验  43
  4.3 结果  43-44
    4.3.1 AIV-H9N2 复方蜂胶纳米佐剂疫苗的质量评价  43-44
    4.3.2 AIV-H9N2 复方蜂胶纳米佐剂疫苗的安全性检验  44
    4.3.3 攻毒保护试验  44
  4.4 讨论  44
  4.5 小结  44-46
第五章复方蜂胶纳米乳佐剂的免疫效力研究  46-54
  5.1 试验材料  46-47
    5.1.1 疫苗  46
    5.1.2 试验动物  46
    5.1.3 试剂及配制  46-47
    5.1.4 主要仪器  47
  5.2 方法  47-49
    5.2.1 分组及免疫  47
    5.2.2 血清HI 抗体检测  47-48
    5.2.3 MTT 淋巴细胞转化试验  48-49
  5.3 结果  49-52
    5.3.1 HI 抗体水平检测  49-50
    5.3.2 MTT 淋巴细胞转化试验  50-52
  5.4 讨论  52-53
  5.5 小结  53-54
结论  54-55
参考文献  55-61
致谢  61-62
个人简介  62

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