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人脂肪干细胞在水凝胶内三维培养的研究

作　者: 张文
导　师: 刘天庆
学　校: 大连理工大学
专　业: 化学工程
关键词: 脂肪干细胞壳聚糖水凝胶三维培养成脂分化
分类号: Q813
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

组织工程的主要思路是将功能性种子细胞接种于作为细胞外基质(extracellular matrix, ECM)替代物的生物相容性良好的支架材料上,经过体外培养及构建后移植到体内受损组织处用以修复受损的组织。这其中,种子细胞在支架材料内的三维培养是十分重要的环节,本文的主要目的是将人来源脂肪干细胞(hADSCs)作为种子细胞,接种到一种新型壳聚糖水凝胶中进行体外及体内的三维培养,考察支架的生物相容性及细胞在支架内部的增殖及分化能情况。本文首先获取并培养hADSCs、制备壳聚糖／β-甘油磷酸钠／胶原(C/GP/CO)水凝胶、并将细胞与支架在低温环境下均匀混合,37℃成胶,于孔板中体外培养。使用CCK-8试剂盒测定水凝胶内hADSCs的增值情况；免疫荧光染色观察hADSCs活性及细胞形态；扫描电子显微镜(SEM)观察细胞在水凝胶内的细胞形态及粘附能力。动物实验部分,将C/GP/CO水凝胶及作为对照组的壳聚糖／β-甘油磷酸钠水凝胶(C／GP)注射植入大鼠皮下,通过对组织切片的免疫组化染色考察水凝胶的生物相容性。同时将hADSCs在体外成脂诱导培养1周后消化并收获与C/GP/CO水凝胶混合后注射植入裸鼠皮下进行体内培养,通过对组织切片的免疫组化染色考察hADSCs在C/GP/CO水凝胶内的体内成脂分化能力。荧光染色结果表明hADSCs在水凝胶内体外培养5天后细胞活性很高,很少细胞死亡,且细胞在材料内充分伸展,细胞形态良好；SEM结果显示hADSCs能够很好的粘附在水凝胶内部并充分伸展；CCK-8测试结果表明在C/GP/CO水凝胶内生长的1(?)ADSCs在培养7天后细胞数量增长约30%。动物实验部分结果显示C/GP/CO水凝胶植入大鼠体内4周内无明显的急性炎症反应,周围组织无感染及坏死,材料表现出良好的生物相容性；免疫组化染色结果显示经体外成脂诱导的hADSCs与C/GP/CO水凝胶混合并植入裸鼠体内4周后,细胞能够明显的向成脂方向分化,植入物内形成大量脂滴,同时伴有血管自发生成,未经体外诱导的hADSCs植入体内后则不发生自发成脂分化现象。

人脂肪干细胞在水凝胶内三维培养的研究

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