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异种去抗原松质骨的生物学特性研究

作　者: 杨军
导　师: 杨群
学　校: 大连医科大学
专　业: 外科学
关键词: 去抗原松质骨脂肪干细胞组织工程支架材料
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:骨骼是人体重要的组成部分,而由于外伤,感染,肿瘤,炎症以及先天疾病等原因造成的骨缺损无时无刻不在威胁着人类的健康,大范围骨缺损以及关节、颌面等部位的特殊形态的骨缺损的修复仍然是临床上难以完全解决的问题。临床常用自体骨或异体骨移植,但存在着取骨区疼痛、感染、取骨量受限、引发机体排斥反应等问题。骨组织工程的研究为解决这一问题带来了希望,组织工程骨的构建涉及种子细胞、细胞外支架材料和构建方法三个重要因素。目前种子细胞多选择成骨细胞或具有多向分化潜能的间充质细胞(如骨髓间充质细胞),这两种细胞的取材和培养方法较为成熟,但损伤较大且来源受限,因此限制了临床的应用。理想的骨组织工程支架材料应满足以下特性:良好的生物相容性和安全性、良好的生物活性、适宜的力学强度、易加工及处理、合适的孔隙率等。一种良好的支架材料不仅要满足前述之条件,还要来源广泛以便于取材。异种去抗原松质骨由于取材方便,具有与人骨相似的孔隙结构,且含有骨形态发生蛋白及其他多种成骨因子,有利于成骨细胞的粘附、增殖及物质的传递,因而受到越来越多的关注。本研究旨在利用传统方法结合超临界二氧化碳萃取技术制备去抗原骨基质材料,继而与人脂肪干细胞结合培养并向成骨细胞方向诱导,以验证猪去抗原松质骨材料的生物学特性和探讨其作为组织工程骨支架材料的可行性。方法:1.取新鲜猪股骨下端松质骨,蒸馏水冲洗,尽量除去表面软组织,经超临界二氧化碳萃取处理,继而经无水乙醇、1:1氯仿,甲醇、双氧水处理后,盐酸脱钙,制成去抗原松质骨载体,并经热重分析,扫描电镜,孔隙率的计算等对骨载体进行表征。2.从人脂肪抽吸物中分离培养脂肪干细胞,选取第五代细胞进行成脂细胞及成骨细胞诱导,并与松质骨载体复合培养,其中一组脂肪干细胞与载体复合培养后向成骨细胞方向诱导,另一组仅为脂肪干细胞与载体复合培养,此过程分两部分,一部分采用体外静态培养,另一部分采用Bellco细胞培养转瓶进行三维动态培养。经倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在载体上生长情况。结果:1.处理后的猪松质骨基本去除了脂肪及蛋白,保留了骨组织中的孔隙结构。2.经倒置相差显微镜和扫描电镜观察,人脂肪干细胞及成骨诱导后的细胞在骨载体上生长良好,形态良好,成骨诱导组碱性磷酸酶阳性表达,矿化结节生成。结论:处理后的猪松质骨有着较好的孔隙直径及孔隙率,对人脂肪干细胞生长及其向成骨细胞方向分化无明显不良影响,具有较好的组织相容性,可作为良好的组织工程骨支架材料。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-13
材料和方法  13-18
  一异种骨支架材料的制备及表征  13-14
  二异种骨支架材料生物相容性的研究  14-18
结果  18-23
  1、大体观察  18
  2、扫描电镜观察  18-19
  3、热重分析  19-20
  4、孔隙率的计算  20
  5、人脂肪干细胞的原代培养及传代  20
  6、人脂肪干细胞向脂肪细胞方向诱导  20-21
  7、人脂肪干细胞向成骨细胞方向诱导  21
  8、人脂肪干细胞生长曲线的测定  21-22
  9、异种骨支架材料结合人脂肪干细胞体外共培养  22
  10、人脂肪干细胞在异种骨支架材料上向成骨细胞方向诱导分化  22-23
讨论  23-26
结论  26-27
参考文献  27-29
综述  29-37
  参考文献  34-37
致谢  37

异种去抗原松质骨的生物学特性研究

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