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骨桥蛋白通过MAPK信号通路上调MMP9表达及与胚胎着床相关性分析

作　者: 杨明
导　师: 孔英
学　校: 大连医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 骨桥蛋白(OPN) 基质金属蛋白酶 9(MMP9) MAPK 信号通路 RL95-2 细胞胚胎着床
分类号: R321
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究骨桥蛋白(OPN)在围着床窗口期的小鼠子宫内膜的变化规律,探讨在人子宫内膜肿瘤细胞 RL95-2细胞(用来模拟着床期子宫内膜细胞)中,OPN能否通过某一信号通路促进MMP9的表达,分析在胚胎着床的过程中OPN所发挥的作用及机制。方法:(1)提取妊娠第1、2、3、4、5天(D1- D5)的小鼠的子宫内膜上皮组织蛋白和mRNA,用Western blot方法和RT-PCR方法检测OPN的表达的变化情况(。2)用重组的OPN蛋白加入到无血清无双抗条件的培养液中刺激RL95-2细胞,用ELISA方法检测RL95-2细胞MMP9表达的变化情况和相应通路的变化情况。(3)构建携带有氨苄抗性表达基因和OPN变异体A(OPN全序列)的质粒,转染入RL95-2细胞中,检测转染后培液中和RL95-2细胞中MMP9的蛋白和mRNA表达情况,分析相应通路的变化情况结果:(1)妊娠期间小鼠子宫内膜OPN的表达变化明显,在妊娠D1-4天随着妊娠天数的增加而增加,在D4天小鼠胚胎着床窗口期表达达到最高峰,D5天表达量开始下降。(2)用OPN重组蛋白刺激RL95-2细胞后,MMP9的表达量明显增加,并与OPN重组蛋白的加入量有着剂量依赖性,即随着OPN重组蛋白加入量的增加而增加,并且OPN能够通过ERK1/2的磷酸化而激活MAPK信号通路促使下游分子MMP9的表达上调,且OPN刺激ERK1/2的磷酸化随着时间的增加而增加,在刺激1小时后达到最高值,但在2h时既开始下降。(3)OPN质粒构建成功,RL95-2细胞的转染效率低下,转染方法有待改进。结论:(1)OPN在妊娠开始阶段到胚胎着床阶段的表达呈递增趋势,并在着床窗口期呈现峰值,着床后其表达有所下降,所以OPN很有可能参与胚胎着床的过程。(2)OPN参与胚胎着床的机制之一可能是通过磷酸化ERK1/2激活MAPK信号通路促进下游分子基质金属蛋白酶9 MMP9的表达,水解子宫内膜上皮细胞以利于胚胎着床。(3)成功构建OPN质粒。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-11
材料和方法  11-20
  一. 实验材料  11-13
  二. 实验方法  13-20
实验结果  20-25
讨论  25-29
结论  29-30
参考文献  30-31
综述  31-43
  参考文献  40-43
致谢  43

骨桥蛋白通过MAPK信号通路上调MMP9表达及与胚胎着床相关性分析

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