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基于γH2AX的免疫荧光分析技术定量检测CT照射后人外周血单个核细胞的DNA损伤

作　者: 张博
导　师: 龚建平
学　校: 苏州大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: 体层摄影术,X线计算机 DLP γH2AX 免疫荧光分析外周血单个核细胞 DNA损伤 DNA双链断裂
分类号: R818.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

第一部分:γH2AX分析定量检测CT照射后人外周血单个核细胞 DNA损伤的体外实验研究目的:以γH2AX的荧光显像和定量检测为依据,通过体外实验研究,初步了解CT辐射剂量与人外周血单个核细胞(PBMCs)γH2AX焦点数量之间的相关性。材料和方法:67名志愿者纳入研究,签署知情同意书后,分别经肘静脉采集外周血标本,分装至抗凝管中,在不同的剂量下进行体外照射,照射后5分钟对血标本进行一系列实验室处理:分离单个核细胞,固定,破膜,封闭,染色,测定γH2AX的表达。荧光显微镜下观察计数γH2AX焦点,分析其与CT辐射剂量之间的关系。CT辐射剂量参数使用DLP值(剂量长度乘积)。统计学分析方法采用秩和检验、t检验、线性相关和回归分析。结果:体外CT照射后5分钟人外周血PBMCsγH2AX焦点数量较基底水平(空白对照)显著增加(剂量阈值>199.64 mGy?cm),通过荧光显微镜检测到的γH2AX焦点数量与DLP值呈线性正相关,直线回归方程模型为:Y=0.1917X+0.1248,有显著统计学意义(P=0.000 R2=0.906)。结论:体外经一定剂量CT照射后,人外周血PBMCs DNA损伤诱发H2AX活化产生γH2AX,其数量与CT辐射剂量有较高的相关性。第二部分:体内外经CT照射后外周血单个核细胞γH2AX焦点数量的初步临床研究目的:通过对临床患者CT照射后外周血单个核细胞(PBMCs)γH2AX焦点数量进行体内外实验研究,对比分析γH2AX焦点数量的差异及可能产生机制,引进一种新的生物剂量标记物——γH2AX,进一步探讨γH2AX分析的作为生物剂量计应用前景。材料和方法:选取符合标准的15名临床CT检查患者为研究对象。签署知情同意书后,CT检查前经肘静脉采集血样4ml/人,按2ml/管分装入2个抗凝管中,标记为①空白对照组,②体外受照组。第①管血样置于37℃孵育箱中以保持细胞活性,备处理。第②管血样固定于病人体表的扫描范围中心,使其始终处于照射野内,扫描结束后取出第②管血样,置入37℃孵育箱中保持细胞活性,备处理;CT检查完成后5分钟,经患者肘静脉再行采集血样2ml/人,编号为③体内受照组,立即同步对3组血样进行一系列实验室处理:分离单个核细胞,固定,破膜,封闭,染色,测定γH2AX的表达。荧光显微镜下观察计数γH2AX焦点,进行对比分析。统计学方法采用t检验、线性相关和回归分析。结果:体内、外受照组CT照射后5分钟的外周血PBMCsγH2AX焦点数量均与DLP值呈线性正相关,相同DLP值时体外受照组的γH2AX焦点数量明显高于体内组(P=0.000<0.05)。结论:γH2AX分析在检测CT辐射剂量方面具有独特优势,是一种新型的生物剂量标记物,其作为生物剂量计在对低剂量电离辐射的研究中有广阔的应用前景。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-9
引言  9-14
  参考文献  12-14
第一部分 γH2AX 分析定量检测CT 照射后人外周血单个核细胞DNA 损伤的体外实验研究  14-30
  材料和方法  14-18
  结果  18-26
  讨论  26-28
  参考文献  28-30
第二部分体内外经CT 照射后外周血单个核细胞γH2AX 焦点数量的初步临床研究  30-45
  材料和方法  30-31
  结果  31-37
  讨论  37-42
  参考文献  42-45
结论  45-47
综述:CT 检查辐射致癌风险的研究进展  47-55
  参考文献  52-55
研究生期间发表的论文及获奖  55-56
中英文缩略词表  56-57
致谢  57-58

基于γH2AX的免疫荧光分析技术定量检测CT照射后人外周血单个核细胞的DNA损伤

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