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RAPD分子标记技术在中药材百合研究中的应用

作　者: 刘湘丹
导　师: 周日宝
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 百合 RAPD DNA多态性指纹图谱
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的:百合为百合科(Liliaceae)百合属(lilium)植物卷丹Lilium lancifolium Thunb.、百合L.brownii F.E.Brown var.viridulumBaker和细叶百合L.pumilum DC.的干燥肉质鳞叶,为临床常用中药材,也是湖南省大宗道地药材之一。对中药材百合的鉴定,国内外文献资料中报道主要采用的方法是性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别,目前从分子水平探讨其遗传差异并对其进行鉴别仅见一篇相关研究报道。本研究应用RAPD技术对湖南、甘肃、江苏、江西、广西五个产地的百合及大百合Cardiocrinum giganteum(Wall.)Makino进行了分析,探讨了分子生物学技术在中药材百合品种品系鉴定及亲缘关系分析上的应用,为鉴定中药材百合品种品系的新方法提供了充分的实验依据。研究方法:采用RAPD技术对百合鳞叶基因组DNA的多态性进行分析;利用紫外凝胶成像系统通过对电泳图像分析建立了百合基因组DNA指纹图谱;利用NTSYS软件进行品种品系间UPGMA聚类分析。研究结果与结论:1、建立了适合百合的PCR-RAPD反应体系;2、从120条随机引物中筛选出35条有效引物,对所有供试材料进行扩增,共获得35张DNA电泳图谱,769条DNA谱带,其中767条为多态带;3、利用凝胶成像分析系统,对电泳图像进行分析,建立了DNA的指纹图谱;4、建立了基于RAPD技术的百合亲缘关系树型图,树型图的聚类结果与用经典方法鉴定的结论一致;5、RAPD技术可从分子水平阐明药材道地性的生物学实质。本研究首次采用RAPD方法鉴别不同百合以及同科植物大百合,建立了基因组指纹图谱,并对其亲缘关系进行了分析,是一个新的有益的尝试。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
引言  9-13
一、实验材料  13-18
  1.药材  13
  2.试剂  13-16
  3.实验仪器  16-18
二、试验流程框图  18-19
三、实验方法  19-26
  1.百合总DNA的制备  19-20
  2.RAPD-PCR反应体系扩增程序的优化  20-22
  3.随机引物的筛选  22-24
  4.琼脂糖凝胶电泳  24
  5.图像分析  24-25
  6.数据处理  25-26
四、实验结果与分析  26-51
  1.供试材料总DNA的质量  26-27
  2.RAPD-PCR反应体系和扩增程序筛选结果  27-33
  3.引物筛选结果  33-34
  4.RAPD扩增产物电泳图  34-37
  5.图像分析  37-46
  6.数据处理与分析  46-51
五、讨论  51-60
  1.关于实验过程的讨论  51-54
  2.关于实验结果的讨论  54-60
六、结论与展望  60-61
  1 结论  60
  2 展望  60-61
七、本研究的创新点  61-62
八、致谢  62-64
九、参考文献  64-66
附录Ⅰ:文献研究  66-71
附录Ⅱ:硕士期间所发表论文  71

RAPD分子标记技术在中药材百合研究中的应用

内容摘要

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