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鮸鱼鳔胶原蛋白的提取及其对小鼠学习记忆的影响

作 者: 陈梅珍
导 师: 陈炯
学 校: 宁波大学
专 业: 海洋生物学
关键词: 鮸鱼鳔 胶原蛋白 学习记忆 RT-PCR Morris水迷宫
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 43次
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内容摘要


鮸鱼是东亚地区的一种具有重要经济价值的海水养殖鱼类,鮸鱼鳔(swim bladder of miiuy croaker, SBM)更是一种具有悠久历史的滋补品,被认为具有增强免疫力,加强脑神经功能和促进学习记忆能力的功效,但是这些功效一直以来都没有经过科学验证。本文通过乙酸酸提取的方法提取出了鮸鱼鳔胶原蛋白(SBMC),通过SDS-PAGE和阳离子交换的方法判断它是一种Ⅰ型胶原蛋白,亚基组成为[α1 (Ⅰ)]2α2 (Ⅰ)。进一步采用胃蛋白酶(pepsin)对所提取的SBMC进行消化,并将SBMC的水解产物对小鼠进行为期28天的灌胃饲养。然后用Morris水迷宫的方法对实验小鼠进行学习记忆能力的检测,结果发现两个剂量SBMC灌胃的小鼠,水迷宫训练期间潜伏期比对照组短,探索期间围绕平台所在象限的时间均高于对照组,实验中各组小鼠的体重、视觉能力和游泳速度都接近。这些结果说明SBMC可特异性地提高小鼠学习记忆能力,而不影响体重增加、视觉能力变化或者运动能力。在水迷宫实验之后,我们用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组实验小鼠大脑海马区中和学习记忆相关的基因mRNA表达变化,包括NR2A、NR2B、BDNF和CREB。结果表明,SBMC不仅能够提高NR2A、NR2B、BDNF和CREB的mRNA表达量,而且提高了NR2B/NR2A的比值,这解释了SBMC灌胃的小鼠学习记忆能力提高的原因。本文的结果将为开发鮸鱼鳔作为功能性食品提供基础。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
引言  9-11
1 功能性食品与学习记忆  11-21
  1.1 功能性食品简介  11-16
    1.1.1 功能性食品的定义  11
    1.1.2 功能性食品和药品的区别  11-12
    1.1.3 功能性食品的来源  12
    1.1.4 常见的功能性食品  12-13
    1.1.5 促进学习记忆能力的功能性食品  13-14
    1.1.6 胶原蛋白  14-16
  1.2 学习记忆的机制  16-19
    1.2.1 学习记忆的检测方法  16-17
    1.2.2 记忆的分类  17
    1.2.3 学习记忆的相关受体  17-19
  1.3 小结  19-21
2 鮸鱼鳔胶原蛋白的提取和纯化  21-28
  2.1 实验材料和仪器  21
    2.1.1 实验材料  21
    2.1.2 实验试剂及配置方法  21
    2.1.3 实验仪器  21
  2.2 实验方法  21-24
    2.2.1 鮸鱼鳔胶原蛋白的提取  21-22
    2.2.2 胃蛋白酶对胶原蛋白的水解  22-23
    2.2.3 SDS-PAGE 检测  23
    2.2.4 胶原蛋白的二硫键分析  23
    2.2.5 SBMC 的阳离子交换层析  23-24
  2.3 实验结果  24-27
    2.3.1 SBMC 的提取和SDS-PAGE 检测  24-25
    2.3.2 SBMC 的二硫键分析  25
    2.3.3 SBMC 的阳离子交换层析  25-27
  2.4 讨论  27-28
3 检测SBMC 对小鼠学习记忆的影响  28-35
  3.1 实验材料  28
  3.2 实验方法  28-29
    3.2.1 实验动物及饲养方法  28
    3.2.2 Morris 水迷宫  28-29
    3.2.3 实验数据处理  29
  3.3 实验结果  29-34
  3.4 讨论  34-35
4 分析SBMC 对学习记忆相关基因表达的影响  35-41
  4.1 实验材料  35
    4.1.1 实验试剂  35
    4.1.2 实验仪器  35
    4.1.3 实验材料处理  35
  4.2 实验方法  35-37
    4.2.1 小鼠海马组织RNA 的提取  35-36
    4.2.2 cDNA 的合成和相关引物  36-37
    4.2.3 qRT-PCR 检测  37
  4.3 实验结果  37-40
    4.3.1 小鼠海马组织总RNA 的抽提  37-38
    4.3.2 SBMC 的灌胃饲养对小鼠海马区相关记忆表达的影响  38-40
  4.4 讨论  40-41
5 结论  41-42
参考文献  42-51
在学研究成果  51-52
项目资助  52-53
致谢  53

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