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鮸鱼鳔胶原蛋白的提取及其对小鼠学习记忆的影响
作 者: 陈梅珍
导 师: 陈炯
学 校: 宁波大学
专 业: 海洋生物学
关键词: 鮸鱼鳔 胶原蛋白 学习记忆 RT-PCR Morris水迷宫
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
鮸鱼是东亚地区的一种具有重要经济价值的海水养殖鱼类,鮸鱼鳔(swim bladder of miiuy croaker, SBM)更是一种具有悠久历史的滋补品,被认为具有增强免疫力,加强脑神经功能和促进学习记忆能力的功效,但是这些功效一直以来都没有经过科学验证。本文通过乙酸酸提取的方法提取出了鮸鱼鳔胶原蛋白(SBMC),通过SDS-PAGE和阳离子交换的方法判断它是一种Ⅰ型胶原蛋白,亚基组成为[α1 (Ⅰ)]2α2 (Ⅰ)。进一步采用胃蛋白酶(pepsin)对所提取的SBMC进行消化,并将SBMC的水解产物对小鼠进行为期28天的灌胃饲养。然后用Morris水迷宫的方法对实验小鼠进行学习记忆能力的检测,结果发现两个剂量SBMC灌胃的小鼠,水迷宫训练期间潜伏期比对照组短,探索期间围绕平台所在象限的时间均高于对照组,实验中各组小鼠的体重、视觉能力和游泳速度都接近。这些结果说明SBMC可特异性地提高小鼠学习记忆能力,而不影响体重增加、视觉能力变化或者运动能力。在水迷宫实验之后,我们用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组实验小鼠大脑海马区中和学习记忆相关的基因mRNA表达变化,包括NR2A、NR2B、BDNF和CREB。结果表明,SBMC不仅能够提高NR2A、NR2B、BDNF和CREB的mRNA表达量,而且提高了NR2B/NR2A的比值,这解释了SBMC灌胃的小鼠学习记忆能力提高的原因。本文的结果将为开发鮸鱼鳔作为功能性食品提供基础。
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全文目录
摘要 4-5 Abstract 5-9 引言 9-11 1 功能性食品与学习记忆 11-21 1.1 功能性食品简介 11-16 1.1.1 功能性食品的定义 11 1.1.2 功能性食品和药品的区别 11-12 1.1.3 功能性食品的来源 12 1.1.4 常见的功能性食品 12-13 1.1.5 促进学习记忆能力的功能性食品 13-14 1.1.6 胶原蛋白 14-16 1.2 学习记忆的机制 16-19 1.2.1 学习记忆的检测方法 16-17 1.2.2 记忆的分类 17 1.2.3 学习记忆的相关受体 17-19 1.3 小结 19-21 2 鮸鱼鳔胶原蛋白的提取和纯化 21-28 2.1 实验材料和仪器 21 2.1.1 实验材料 21 2.1.2 实验试剂及配置方法 21 2.1.3 实验仪器 21 2.2 实验方法 21-24 2.2.1 鮸鱼鳔胶原蛋白的提取 21-22 2.2.2 胃蛋白酶对胶原蛋白的水解 22-23 2.2.3 SDS-PAGE 检测 23 2.2.4 胶原蛋白的二硫键分析 23 2.2.5 SBMC 的阳离子交换层析 23-24 2.3 实验结果 24-27 2.3.1 SBMC 的提取和SDS-PAGE 检测 24-25 2.3.2 SBMC 的二硫键分析 25 2.3.3 SBMC 的阳离子交换层析 25-27 2.4 讨论 27-28 3 检测SBMC 对小鼠学习记忆的影响 28-35 3.1 实验材料 28 3.2 实验方法 28-29 3.2.1 实验动物及饲养方法 28 3.2.2 Morris 水迷宫 28-29 3.2.3 实验数据处理 29 3.3 实验结果 29-34 3.4 讨论 34-35 4 分析SBMC 对学习记忆相关基因表达的影响 35-41 4.1 实验材料 35 4.1.1 实验试剂 35 4.1.2 实验仪器 35 4.1.3 实验材料处理 35 4.2 实验方法 35-37 4.2.1 小鼠海马组织RNA 的提取 35-36 4.2.2 cDNA 的合成和相关引物 36-37 4.2.3 qRT-PCR 检测 37 4.3 实验结果 37-40 4.3.1 小鼠海马组织总RNA 的抽提 37-38 4.3.2 SBMC 的灌胃饲养对小鼠海马区相关记忆表达的影响 38-40 4.4 讨论 40-41 5 结论 41-42 参考文献 42-51 在学研究成果 51-52 项目资助 52-53 致谢 53
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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