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左旋棉酚联合低浓度阿霉素诱导软组织肉瘤细胞凋亡及其作用机制的实验研究

作　者: 张昭军
导　师: 锡林宝勒日
学　校: 新疆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 左旋棉酚阿霉素软组织肉瘤细胞凋亡
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 23次
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内容摘要

目的：研究左旋棉酚联合低浓度阿霉素对软组织肉瘤人纤维肉瘤HT1080细胞和滑膜肉瘤SW982细胞的凋亡及其作用机制,为提高肿瘤治疗效果提供理论依据。方法：采用MTT法检测药物对肿瘤细胞的抗增殖作用,应用Wright-Giemsa染色、Hoechst 33258染色、透射电镜观察药物作用后肿瘤细胞的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳分析药物作用后肿瘤细胞DNA有无出现梯状带型,用流式细胞仪检测药物作用后肿瘤细胞的凋亡率和细胞周期的变化。Western-Blot法检测药物作用后肿瘤细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达,比色分析法测定药物作用后肿瘤细胞内Caspase-3和Caspase-9的活性变化。结果：左旋棉酚与低浓度阿霉素对软组织肉瘤人纤维肉瘤HT1080细胞和滑膜肉瘤SW982细胞具有抑制增殖作用,联合应用抑制增殖作用更强,具有浓度与时间依赖性。左旋棉酚与低浓度阿霉素能诱导软组织肉瘤人纤维肉瘤HT1080细胞和滑膜肉瘤SW982细胞凋亡,两药作用后肿瘤细胞出现典型的凋亡细胞所具有的特征性改变,DNA琼脂糖凝胶电泳观察到明显的梯状带型,流式细胞仪检测发现左旋棉酚与低浓度阿霉素能诱导肿瘤细胞凋亡,联合应用作用更强。左旋棉酚与低浓度阿霉素对软组织肉瘤人纤维肉瘤HT1080细胞和滑膜肉瘤SW982细胞具有细胞周期调节作用,左旋棉酚使细胞阻滞在G1期,阿霉素使细胞阻滞在S期,两药联合应用使S期明显增加。左旋棉酚与低浓度阿霉素均导致肿瘤细胞Bcl-2蛋白表达逐渐减少,Bax蛋白的表达逐渐增多,两药联合应用变化更加明显。在诱导肿瘤细胞凋亡的过程中,肿瘤细胞内出现Caspase-9、Caspase-3的活化,两药联合应用变化更加明显。结论：左旋棉酚与低浓度阿霉素对软组织肉瘤人纤维肉瘤HT1080和滑膜肉瘤SW982细胞有明显抑制增殖及诱导凋亡作用,联合应用作用更强,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达及影响细胞周期有关。本研究通过左旋棉酚与低浓度阿霉素联合应用的体外实验,探讨了其治疗软组织肉瘤的可行性及其相互作用机理,为筛选与阿霉素有效配伍的抗肿瘤药物提供了实验依据。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料与方法  12-20
  1. 材料  12-15
    1.1 细胞  12
    1.2 主要实验仪器  12-13
    1.3 主要试剂与耗材  13-14
    1.4 药物配制  14
    1.5 试剂的配制  14-15
  2. 方法  15-20
    2.1 细胞培养  15-16
    2.2 MTT法测定药物敏感性  16-17
    2.3 细胞凋亡的检测  17-18
    2.4 流式细胞仪检测细胞周期的改变  18
    2.5 Western-Blot检测Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达  18-19
    2.6 Caspase-3、9活性分析  19
    2.7 统计学分析  19-20
结果  20-34
讨论  34-39
小结  39-40
附图  40-44
致谢  44-45
参考文献  45-50
综述  50-64
  参考文献  58-64
攻读硕士学位期间发表的学术论文  64-65
导师评阅表  65

左旋棉酚联合低浓度阿霉素诱导软组织肉瘤细胞凋亡及其作用机制的实验研究

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