学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

尿微量白蛋白胶体硒试纸条的初步制备

作　者: 张艳
导　师: 李红玉
学　校: 兰州大学
专　业: 微生物学
关键词: 尿微量白蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体 胶体硒 试纸条
分类号: R446.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 84次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目前糖尿病的病死率仅次于心脑血管疾病和肿瘤,已成为威胁人类健康与生命的第三大疾病。糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病全身微血管合并症,也是糖尿病微血管病变最危险的并发症之一。由于DN的肾脏病变为慢性进行性损害,临床症状出现较晚,一般出现尿蛋白时病程多在10年以上,临床DN一旦出现持续性蛋白尿,其肾功能将不可遏制地进行下降。因此能够早期诊断、早期治疗以延缓糖尿病肾病的发展,是目前本病治疗的重点。尿微量白蛋白(Microalbuminuria,MAU)是指尿中白蛋白含量超出健康人参考范围,但不能用常规的方法检测出这种微量的变化。MAU是公认的糖尿病肾病的早期诊断指标,MAU含量检测对糖尿病肾病的早期诊断和早期治疗有重要的参考价值和临床意义。目前检测MAU方法常见的有放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)和免疫比浊法。RIA法半衰期短、存在放射性污染。ELISA法虽然检出限较低(0.15mg/L),但是检测时间长,不适合现场测定:免疫比浊法简便快速,重复性好,1小时可检测30份以上样品,但需用高质量的特种蛋白分析仪。胶体硒免疫层析法克服了以上三种方法的缺点,同时又具有快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便、无需任何仪器设备、结果判断直观可靠、经济实用的特点。本实验通过动物常规免疫技术、细胞融合技术、杂交瘤细胞的选择性培养和克隆化,最后建立了4株稳定分泌抗人MAU单克隆抗体细胞株:A4、A11、C8、E4。在此基础上完成了单克隆抗体的制备、纯化及鉴定等方面的工作,由此选取E4和C8单抗来制备试纸条。通过抗坏血酸还原亚硒酸的反应制备胶体硒,利用免疫层析、硒标抗体和双抗夹心原理初步组装试纸条,通过抗原—抗体的特异性反应,以HSA抗原作为样品,进行了初步的试纸条效能实验,取得了一定的效果。

全文目录


缩略词表  5-6
中文摘要  6-7
Abstract  7-8
第一部分 文献综述  8-24
  1 尿微量白蛋白(MAU)与糖尿病肾病(DN)的研究进展  8-15
    1.1 尿微量白蛋白的定义及发生机理  8-10
    1.2 MAU与糖尿病肾病的关系  10-11
    1.3 糖尿病肾病(DN)的早期诊断指标  11-15
    1.4 检测尿微量白蛋白的方法  15
  2 免疫层析快速诊断试纸条技术  15-21
    2.1 硒标免疫层析的原理  16
    2.2 快速诊断试纸条技术的应用  16-18
    2.3 诊断MAU免疫层析试纸条的研究概述  18-20
    2.4 快速诊断试纸条技术的现状与展望  20-21
  3 立论依据及研究意义  21-24
第二部分 抗人血清白蛋白单克隆抗体的制备  24-41
  1 实验材料  24-27
    1.1 实验动物  24
    1.2 抗原  24
    1.3 骨髓瘤细胞系  24-25
    1.4 主要实验仪器  25
    1.5 细胞培养及冻存试剂  25-26
    1.6 磷酸盐缓冲液  26
    1.7 酶联免疫吸附实验(ELISA)相关溶液的配置  26-27
    1.8 酶标二抗  27
    1.9 饱和硫酸桉溶液  27
    1.10 其它实验试剂  27
    1.11 其它实验器材  27
  2 实验方法  27-33
    2.1 免疫小鼠  27-28
    2.2 SP2/0细胞的驯化  28-29
    2.3 细胞融合  29-30
    2.4 杂交瘤细胞的筛选  30-31
    2.5 杂交瘤的克隆培养  31-32
    2.6 杂交瘤细胞的冻存和复苏  32
    2.7 单克隆抗体的生产  32
    2.8 单克隆抗体的提纯  32-33
  3 实验结果及分析  33-39
    3.1 免疫小鼠  33-34
    3.2 SP2/0细胞的驯化  34
    3.3 细胞融合  34-36
    3.4 间接ELISA法筛选  36-37
    3.5 杂交瘤细胞的克隆化筛选  37-38
    3.6 单克隆抗体的生产  38
    3.7 纯化抗体蛋白浓度  38-39
  4 讨论  39-41
第三部分 抗人血清白蛋白单克隆抗体的鉴定  41-51
  1 材料与方法  41-45
    1.1 实验材料  41-42
    1.2 实验方法  42-45
  2 实验结果及分析  45-49
    2.1 杂交瘤细胞株染色体分析  45-46
    2.2 Ig类和IgG亚类的测定  46-47
    2.3 单抗纯度的测定  47
    2.4 单抗效价的检测  47
    2.5 单抗相对亲和力的测定  47-48
    2.6 单克隆抗体交叉反应鉴定  48-49
    2.7 杂交瘤细胞株的稳定性分析  49
  3 讨论  49-51
第四部分 胶体硒的制备及试纸条的组装  51-60
  1 实验材料  51
    1.1 胶体硒制备试剂  51
    1.2 试纸条的组装材料  51
    1.3 其它试剂及器材  51
  2 实验方法  51-54
    2.1 胶体硒的制备  51-52
    2.2 试纸条的组装  52-54
  3 实验结果及分析  54-57
    3.1 胶体硒的制备  54-55
    3.2 试纸条的组装  55-57
  4 讨论  57-60
第五部分 结论  60-61
参考文献  61-68
致谢  68-69
附1 实验动物许可证明  69

相似论文

  1. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  2. 甲型流感病毒M2蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究,R392
  3. STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选,R373
  4. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  5. 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
  6. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达与单克隆抗体的制备,S852.65
  7. 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定,S852.65
  8. 抗噻菌灵单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立,S482.2
  9. 氯噻啉酶联免疫吸附分析方法研究,S482.3
  10. 华东地区鸭圆环病毒感染流行病学调查及其单克隆抗体的制备,S858.32
  11. 猪TNF-α单克隆抗体制备与PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞TNF-α变化规律研究,S858.28
  12. H9亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及其AC-ELISA检测方法的建立,S855.3
  13. 日本血吸虫重组蛋白rSjGST的表达纯化及单克隆抗体的制备和特性鉴定,R392
  14. 三聚氰胺单克隆抗体制备及间接竞争ELISA方法的初步建立,S859.84
  15. 早发2型糖尿病尿微量白蛋白与肌酐比值异常的相关危险因素分析,R587.1
  16. 尿微量蛋白检测在肺炎支原体感染中的诊断意义,R725.6
  17. 人TLT-2基因转染细胞株的构建及其单克隆抗体的研制,R392
  18. 乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与初步应用,R392
  19. 鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究,R392
  20. 鼠抗人PD-L2单克隆抗体的制备及人可溶性PD-L2ELISA试剂盒的研制,R392
  21. 人乳头瘤病毒16型E7蛋白单克隆抗体的研制,R737.33

中图分类: > 医药、卫生 > 临床医学 > 诊断学 > 实验室诊断 > 免疫学检验
© 2012 www.xueweilunwen.com