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蓝光对人视网膜色素上皮细胞α1D亚基蛋白表达及分泌功能的影响

作　者: 李海辉
导　师: 蔡善君
学　校: 遵义医学院
专　业: 眼科学
关键词: 光损伤 色素上皮 钙离子 α1D亚基 VEGF
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的探讨蓝光导致人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞胞内钙离子浓度变化；L-型钙通道亚基α1D基因表达的变化；RPE分泌VEGF, bFGF及PEDF的变化及其与L-型钙通道神经内分泌亚型(α1D)亚基蛋白表达变化之间的关系。以及二氢吡啶类化合物(Dihydropyridines, DHPs)硝苯地平、(-)Bay K8644是否可以干预。方法将第四代体外培养的人RPE细胞随机分为4组,A组：对照组；B组：光照组；C组：光照+硝苯地平组；D组：光照+(-)Bay K8644组,用2000±5001ux蓝光照射体外培养的人RPE细胞6h,24h终止培养,酶联免疫法测定细胞分泌的血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor, VEGF)碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF),色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF);蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测L-型钙通道α1D亚基的蛋白表达；逆转录聚合酶联反应(RT-RCR)与荧光定量PCR技术分析L-型钙通道神经内分泌亚基α1DmRNA的表达；用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度。结果(1)RPE细胞分泌功能变化：VEGF：光照组与光照+(-)Bay K8644组高于对照组,差异有统计学意义(P=0.000,0.000)；光照+(-)Bay K8644组VEGF浓度高于光照组(P=0.000)；光照+硝苯地平组低于光照组和对照组,差异有统计学意义(P=0.000,0.001)。bFGF：光照组,光照+(-)Bay K8644组高于对照组,差异有统计学意义(P=0.019,0.000)；光照+硝苯地平组bFGF浓度低于光照组,差异有统计学意义(P=0.000)；光照+(-)BayK8644组bFGF浓度高于光照组(P=0.006)光照+硝苯地平组与对照组比较bFGF差异无统计学意义(P=0.078)。PEDF：光照组、光照+硝苯地平组、光照+(-)Bay K8644组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.318,0.411,0.860)；光照+硝苯地平组、光照+(-)Bay K8644组与光照组比较,差异无统计学意义(P=0.856,0.243)；光照+(-)Bay K8644组与光照+硝苯地平组比较,差异无统计学意义(P=0.321)(2)RPE细胞L-型钙通道α1D亚基蛋白表达的变化：光照组、光照+(-)Bay K8644组α1D亚基/βactinIOD值均高于对照组,差异有统计学意义(P=0.000,0.000)；光照+(-)Bay K8644组高于光照+硝苯地平组,差异有统计学意义(P=0.000)。聚丙烯酰胺凝胶显示光照组和光照+(-)Bay K8644组α1D亚基蛋白表达高于对照组与光照+硝苯地平组。(3)各组RPE细胞L-型钙通道α1D亚基蛋白表达量与RPE细胞分泌VEGF浓度存在正相关,相关函数为Y=0.7377X+0.4392,(Y为VEGF浓度,X为α1D亚基蛋白表达量),相关系数r有统计学意义。(r=0.674,F=8.333,P=0.016),各组RPE细胞L-型钙通道α1D亚基蛋白表达量与RPE细胞分泌bFGF浓度相关函数为Y=0.0739X+0.2466, (Y为bFGF浓度,X为α1D亚基蛋白表达量),相关系数r无统计学意义(r=0.537,F=4.061,P=0.072)。(4)细胞内钙离子浓度变化：光照组、(-)BayK8644组、光照+(-)BayK8644组RPE胞内钙离子荧光强度高于无光照组,差异有统计学意义(P=0.000,0.000,0.000),硝苯地平组低于无光照组,差异有统计学意义(P=0.000),光照+硝苯地平组与无光照组相比较,硝苯地平组与光照+硝苯地平组比较,差异有统计学意义(P=0.000,0.000),(-)BayK8644组与光照+(-)BayK8644组比较,差异无统计学意义(P=0.155)。(5)α1D亚基mRNA的表达：光照组、光照+(-)Bay K8644组与光照+硝苯地平组α1D亚基mRNA均高于对照组,差异有统计学意义(P=0.023,0.006,0.010)；光照+(-)Bay K8644组高于光照组与光照+硝苯地平组,差异有统计学意义(P=0.032,0.039)；光照+硝苯地平组与光照组比较无统计学意义(P=0.459)。结论(1)蓝光照射导致人RPE细胞L-型钙通道α1D亚基mRNA及蛋白表达量升高,VEGF,bFGF分泌量增加,α1D亚基蛋白表达与分泌VEGF量之间呈正相关；(2)钙通道抑制剂硝苯地平可以使人RPE细胞α1D亚基蛋白表达降低,VEGF, bFGF分泌减少,而该通道激动剂(-)Bay K8644使人RPE细胞α1D亚基蛋白表达上调,VEGF, bFGF分泌增多。(3)钙离子浓度升高参与蓝光照射导致体外培养的人RPE细胞的损伤过程。

全文目录


英汉缩略词  6-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-12
前言  12-14
第一部分人RPE细胞的体外培养、鉴定、以及蓝光光损伤模型的建立  14-23
  材料与方法  14-17
  结果  17-18
  附图  18-23
第二部分 蓝光对人RPE细胞分泌功能的影响  23-27
  材料与方法  23-24
  结果  24-27
第三部分 蓝光对人RPE细胞α1D亚基蛋白表达的影响  27-34
  材料与方法  27-29
  结果  29-34
讨论  34-37
结论  37-38
参考文献  38-41
RPE细胞光损伤机制的研究进展(综述)  41-51
  参考文献  46-51
致谢  51-52
作者简介  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 眼科学 > 视网膜及视神经疾病 > 视网膜疾病
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