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SKBR-3乳腺癌细胞中Hsp70与Her-2蛋白复合物的鉴定及其提取纯化

作　者: 任春秀
导　师: 魏建民
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 乳腺癌细胞株热休克蛋白70 Her-2 分离纯化
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 23次
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内容摘要

乳腺癌是严重威胁妇女健康的疾病,占女性恶性肿瘤死亡率的首位,近年来,国内外大量研究显示:原癌基因Her-2在20% ~30%的乳腺癌患者中可见扩增和过度表达,该基因的扩增及其过表达常提示肿瘤恶性程度高,可作为判断乳腺癌预后的一个独立指标。此外,大量研究表明,来源于肿瘤的组织或细胞中存在一种或多种不同水平热休克蛋白的表达,其中热休克蛋白70与肿瘤的发生、发展密切相关。随着对热休克蛋白70结构、功能以及与其相关蛋白作用的了解,为肿瘤治疗的研究打开了新局面。本论文以SKBR-3乳腺癌细胞株为主要细胞株,探讨了Hsp70-Her2蛋白复合物的鉴定、提取及纯化的方法,拟建立一个稳定、高效的分离、纯化技术平台,为探索新的乳腺癌个体化免疫治疗奠定理论及实验基础。本文以高表达原癌基因Her-2的乳腺癌细胞株SKBR-3作为实验细胞,经流式细胞技术检测其中Her-2的表达情况,结果显示原癌基因Her-2在SKBR-3细胞株中高表达。经免疫共沉淀方法检测细胞株中Hsp70和Her-2癌基因蛋白的存在形式:Her-2癌基因蛋白与Hsp70在细胞株中以复合物的形式存在。采用裂解液裂解、超声破碎、高速离心、ConA Sepharose亲和层析结合ADP agarose亲和层析方法,从热休克(42℃)处理后的人乳腺癌细胞株SKBR-3中分离纯化出Hsp70/Her-2癌基因蛋白复合物,并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western-blot点印记进行检测,最后用PEG20000浓缩蛋白后用BCA法对蛋白质进行定量,总蛋白的浓度是258μg/mL。该工作的完成为进一步研究以Hsp70/Her-2癌基因蛋白复合物为基础的乳腺癌免疫治疗提供了依据。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-9
1 引言  9-17
  1.1 乳腺癌概述  9-10
  1.2 Her-2 基因与乳腺癌研究进展  10-13
    1.2.1 Her-2 基因的提出  10
    1.2.2 Her-2 基因的结构和功能  10-11
    1.2.3 Her-2 基因的信号转导  11
    1.2.4 Her-2 基因与乳腺癌的靶向治疗的研究进展  11-13
  1.3 HSP70 与乳腺癌的研究进展  13-17
    1.3.1 热休克蛋白简介  13-14
    1.3.2 Hsp70 的结构和功能  14-15
    1.3.3 Hsp70 与肿瘤免疫的研究进展  15-17
  1.4 本研究的立论依据和意义  17
2 材料与方法  17-23
  2.1 材料  17-19
    2.1.1 主要化学试剂  17-18
    2.1.2 乳腺癌细胞株  18
    2.1.3 主要仪器及设备  18
    2.1.4 主要试剂的配制  18-19
  2.2 方法  19-23
    2.2.1 肿瘤细胞的体外培养  19-20
    2.2.2 流式细胞术检测  20
    2.2.3 免疫共沉淀检测  20-21
    2.2.4 Hsp70/Her-2 癌基因蛋白复合物的纯化  21-22
    2.2.5 Hsp70/Her-2 癌基因蛋白复合物分子点印记检测  22-23
    2.2.6 蛋白复合物的浓缩及定量  23
3 结果  23-30
  3.1 细胞培养结果  23-24
  3.2 流式细胞术检测结果  24-25
  3.3 免疫共沉淀检测结果  25
  3.4 各柱分离样品的SDS-PAGE 电泳结果  25-27
  3.5 各柱分离样品的点印记检测结果  27-29
  3.6 总蛋白定量结果  29-30
4 讨论  30-31
5 结论  31-32
致谢  32-33
参考文献  33-39
作者简介  39

SKBR-3乳腺癌细胞中Hsp70与Her-2蛋白复合物的鉴定及其提取纯化

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