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酶促合成阿昔洛韦糖基衍生物及其性质研究

作　者: 蒋波
导　师: 朱利民
学　校: 东华大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 阿昔洛韦阿昔洛韦糖基衍生物单糖酶促合成生理活性
分类号: TQ463.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

阿昔洛韦是一种重要的嘌呤类抗病毒药物,具有广谱抗病毒性质,但由于阿昔洛韦水溶性差,生物利用度低等缺点,限制了它的应用。为了克服阿昔洛韦的缺点,合成和筛选出具有良好水溶性和抗病毒活性的阿昔洛韦衍生物,本文选择具有多种生物活性的糖分子作为修饰基团,酶促合成了阿昔洛韦-半乳糖衍生物、阿昔洛韦-甘露糖衍生物、阿昔洛韦-葡萄糖衍生物,并对糖基衍生物的体外水溶性、释放原药的速率及抗病毒能力进行了考察。论文首先通过不同链长的丁二酸、己二酸、癸二酸为原料制备出了相应的丁二酸二乙烯酯、己二酸二乙烯酯及癸二酸二乙烯酯作为阿昔洛韦与糖的连接臂。分离纯化出不同链长的二酸二乙烯酯进一步与葡萄糖、甘露糖及半乳糖进行酶促酯交换反应,从而得到三种单糖乙烯酯。通过对产率及反应活性的研究,筛选出了己二酸二乙烯酯为最适的阿昔洛韦与葡萄糖、半乳糖、甘露糖的连接臂。论文进而以单糖乙烯己二酯为糖基供体,酶促酯交换合成阿昔洛韦糖基衍生物,并分别研究了酶源、反应介质、酶的添加量、反应底物摩尔比、反应温度及反应时间对阿昔洛韦糖基衍生物产率的影响。结果表明最适反应条件为:以枯草杆菌蛋白酶为生物催化剂,在吡啶中反应,酶浓度为20 mg/mL,单糖乙烯己二酯与阿昔洛韦的摩尔比为1:2,反应温度为50℃,反应时间为72 h。论文对阿昔洛韦糖基衍生物的性质研究中,首先选择在体外模拟胃液pH值(1.2)和肠液的pH值(7.4)的条件下,采用高效液相色谱法考察阿昔洛韦糖基衍生物的水溶性和释放阿昔洛韦原药的速率。可以得到,在pH 1.2及pH 7.4条件下,阿昔洛韦糖基衍生物的水溶性和阿昔洛韦原药相比得到了显著提高(＞100倍),糖基衍生物的原药释放速率均满足一级反应动力学方程。其中阿昔洛韦-葡萄糖衍生物的水溶性最高、释放速率最快。阿昔洛韦糖基衍生物的体外抗乙肝病毒的能力以HepG2.2.15细胞模型评价。通过MTT法测定糖基衍生物和阿昔洛韦原药的细胞毒性,ELISA测定了阿昔洛韦糖基衍生物和阿昔洛韦原药对HBsAg和HBeAg的抑制率,得到阿昔洛韦-半乳糖衍生物、阿昔洛韦-甘露糖衍生物、阿昔洛韦-葡萄糖衍生物、阿昔洛韦原药对HBsAg的治疗指数TI分别为121.9,46.9,54.8,7.1;对HBeAg的治疗指数TI分别为54.8,34.2,46.9,5.7。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
1 绪论  11-21
  1.1 药物衍生化简介  11-16
    1.1.1 药物衍生化原理  11
    1.1.2 药物衍生化的类型  11-13
    1.1.3 酶促合成药物衍生物的应用  13-16
  1.2 糖类在药物衍生化修饰中的应用  16-18
    1.2.1 糖的生物学功能概述  16-17
    1.2.2 含糖衍生物的研究现状  17-18
  1.3 阿昔洛韦的研究现状  18-19
  1.4 课题的目的、研究内容及创新点  19-21
    1.4.1 选题目的  19-20
    1.4.2 研究内容  20
    1.4.3 课题的创新点  20-21
2 糖乙烯酯的酶促合成  21-32
  2.1 引言  21
  2.2 实验材料与实验仪器  21-23
    2.2.1 实验材料  21-22
    2.2.2 实验仪器  22-23
  2.3 实验方法及实验步骤  23-26
    2.3.1 二酸二乙烯酯的合成  23
    2.3.2 糖乙烯酯的酶促合成  23-25
    2.3.3 糖基供体碳链长度的筛选  25-26
  2.4 实验结果与讨论  26-31
    2.4.1 二酸二乙烯酯的表征及分析  26-27
    2.4.2 葡萄糖、甘露糖、半乳糖乙烯酯表征与分析  27-30
    2.4.3 糖基供体碳链长度的选择  30-31
  2.5 本章小结  31-32
3 酶促合成阿昔洛韦糖基衍生物  32-43
  3.1 引言  32
  3.2 实验材料与实验仪器  32-34
    3.2.1 实验材料  32-33
    3.2.2 实验仪器  33-34
  3.3 实验方法与步骤  34-36
    3.3.1 阿昔洛韦糖基衍生物的酶促合成路线  34
    3.3.2 阿昔洛韦糖基衍生物的合成步骤  34
    3.3.3 阿昔洛韦糖基衍生物产率检测方法  34-35
    3.3.4 酶促合成条件优化  35-36
  3.4 实验结果与讨论  36-42
    3.4.1 阿昔洛韦-葡萄糖衍生物的结构表征  36-37
    3.4.2 阿昔洛韦-甘露糖衍生物的结构表征  37
    3.4.3 阿昔洛韦-半乳糖衍生物的结构表征  37-38
    3.4.4 阿昔洛韦糖基衍生物的结构分析  38
    3.4.5 酶促合成条件优化  38-42
  3.5 本章小结  42-43
4 阿昔洛韦糖基衍生物的性质测定  43-53
  4.1 引言  43
  4.2 实验材料与设备  43-45
    4.2.1 实验材料  43
    4.2.2 实验仪器  43-45
  4.3 实验方法  45-46
    4.3.1 阿昔洛韦糖基衍生物水溶性测定方法  45
    4.3.2 阿昔洛韦糖基衍生物降解测定方法  45
    4.3.3 阿昔洛韦糖基衍生物的体外抗乙肝病毒能力测定  45-46
  4.4 实验结果与讨论  46-51
    4.4.1 阿昔洛韦糖基衍生物水溶性  47
    4.4.2 阿昔洛韦糖基衍生物降解  47-49
    4.4.3 阿昔洛韦糖基衍生物的体外抗病毒能力  49-51
  4.5 本章小结  51-53
5 结论  53-55
参考文献  55-60
附录  60-64
攻读硕士学位期间发表的论文和专利  64-66
致谢  66

酶促合成阿昔洛韦糖基衍生物及其性质研究

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