学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

大豆细菌性斑点病菌hrpZ_（Psgl2）基因及其编码蛋白功能的研究

作　者: 李娟
导　师: 张佳环
学　校: 吉林农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: hrpZPsg12基因突变体 real-time PCR 防卫反应
分类号: S435.651
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 39次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

大豆细菌性斑点病是危害大豆的重要病害之一,它的病原菌是革兰氏阴性细菌丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv. glycinea)。在革兰氏阴性细菌中,存在一类决定病原菌的致病性,以及在抗性或非寄主植物上引起过敏性反应的基因,即hrp基因。在此类基因中,有一部分编码harpin蛋白。为了明确革兰氏阴性细菌丁香假单胞编码harpin蛋白的功能,本论文对大豆细菌性斑点病菌的hrpZ基因及其编码蛋白进行了比较深入的研究。我们采用定点插入突变的方法,构建突变体菌株。从野生型菌株Psg12中克隆hrpZPsg12基因部分序列477bp,并与自杀载体连接后电转化入野生型菌株Psgl2中,发生同源重组后经氯霉素抗性筛选,得到突变菌株477-1。其主要目的是将hrpZPsg12基因破坏,改变hrpZpsgl2基因正常功能。从野生型菌株Psgl2中克隆hrpZPsg12基因全序列1026bp,并与互补载体连接后电转化入突变菌株477-1中,经过卡那霉素抗性筛选得到互补菌株1026-5。将野生型菌株、突变菌株和互补菌株共同接种大豆观察病原菌对大豆的致病性变化。结果表明,Psg12菌株接种的病斑较大,突变子的较小,互补子的接近野生型菌株Psg12;病斑中细菌繁殖量分析表明,野生型菌株Psg12繁殖量最高,突变体477-1的最低,互补子1026-5的接近野生型菌株Psg12的繁殖量。这说明hrpZPsg12基因能够增强大豆细菌性斑点病菌对大豆的致病性。将突变子、互补子和野生型菌株接种烟草后,结果表明,三种菌株在烟草上产生的过敏性反应斑大小有明显差异,突变体产生的反应斑显著地小于野生型菌株产生的,互补菌株产生的反应斑接近野生菌株的。为了在分子水平上确定hrpZPrg12基因编码的蛋白HrpZPsg12是否激发植物产生防卫发应,我们首先通过IPTG诱导后提取HrpZPsg12。在对烟草进行外源处理5天后提取RNA,经反转录后得到cDNA,以其为模板进行real-time PCR检测分析HCD标志基因hsr203和hinl。结果显示,HrpZPsg12能诱导烟草防卫基因hsr203和hinl的表达,即能够激发烟草发生防卫反应。综上所述,我们得出结论hrpZPsg12基因能够增强病原菌对大豆的致病性,在烟草上产生过敏性反应。hrpZPsg12基因编码的蛋白HrpZPsg12可以激发烟草植株产生防卫反应。如今,农药残留等问题已经引起人们的广泛关注,利用生物技术开发生物农药是解决这一问题的重要途径之一。本试验获得的hrpZPsg12基因突变体可以作为生防菌株开发利用。作为一类广谱的蛋白激发子,蛋白hrpZPsg12可以试制生物农药,喷施植物,增强植物的抗性。

大豆细菌性斑点病菌hrpZ_（Psgl2）基因及其编码蛋白功能的研究

内容摘要

全文目录

相似论文