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白芷的质量控制与体内外代谢研究

作　者: 朱红
导　师: 张兰桐
学　校: 河北医科大学
专　业: 药物分析学
关键词: 白芷香豆素胶束毛细管电泳 LC-MS 蛇床夫内酯含量测定药物代谢动力学排泄
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f.或杭白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss.) Shan et Yuan的干燥根。主治感冒头痛,眉棱骨痛,鼻塞,鼻渊,牙痛白带,疮疡肿痛等症,已有2000多年的历史。香豆素类化合物作为白芷中的主要有效成分,主要有抗组胺、促进脂肪代谢、解痉、抗菌、抗癌、兴奋运动和呼吸中枢、抑制花生四烯酸诱导的血小板聚集等作用。本研究主要应用毛细管电泳法对白芷中的多种香豆素类成分同时进行定量分析,对白芷进行全面的质量控制。药物代谢是机体对药物进行化学处置的一个不可缺少的重要环节。研究药物代谢有助于明确药物的作用机制、副作用以及毒性,对合理制定药物的给药剂量、给药方式等提供依据。本文对白芷中有效成分蛇床夫内酯的体内外代谢和排泄进行研究,为进一步研究白芷的代谢途径和排泄动力学奠定基础。第一部分毛细管电泳法同时测定白芷中8种香豆素类有效成分目的:建立用毛细管电泳同时测定白芷中香豆素类有效成分东莨菪内酯、花椒毒酚、花椒毒素、佛手柑内酯、氧化前胡素、欧前胡素、蛇床夫内酯和异欧前胡素的方法。方法:以石英毛细管柱(75μm×60 cm,有效长度30 cm)作为分离通道,以10 mmol/L硼砂-40mmol/L十二烷基硫酸钠-20%乙腈作为电泳缓冲液,工作电压22 kV,温度20℃,检测波长214 nm。结果:8种成分在20 min内实现良好分离,各成分分别在1.25~20.04、1.78~28.53、0.44~7.01、0.67~10.74、7.62~121.86、3.94~63.08、2.89~46.21、3.02~48.35ng/mL范围内线性关系良好,且r≥0.9971,各成分的回收率为92.7%~105.6%,结果符合含量测定的要求。结论:该方法同时测定了白芷中8种香豆素类有效成分,方法简便、快速、分离度好,准确度高,为科学评价与有效控制白芷药材质量提供新方法。第二部分白芷有效成分蛇床夫内酯的体外代谢研究目的:通过微生物转化法和肠内菌法研究蛇床夫内酯的体外代谢,发现代谢产物,并通过放大实验制备代谢产物单体。方法:1.微生物转化法:通过比较了20种加药菌液样品和菌液空白、药物空白的HPLC-PDA图谱,寻找代谢产物,筛选出转化能力最强的菌种对微生物转化实验进行放大,得到代谢产物单体,通过1H-NMR和MS方法鉴定其代谢产物,确定结构。2.肠内菌法:将大鼠新鲜粪便和蛇床夫内酯于体外厌氧温孵培养,对蛇床夫内酯进行体外代谢研究,寻找代谢产物。结果:1.微生物转化法:发现4个代谢产物,经过筛选,用菌株AS 3.970对蛇床夫内酯进行转化放大实验,得到其中两个代谢产物单体,通过1H-NMR和MS法对其进行结构确证,经鉴定,代谢产物分别为3",8-甲氧基异欧前胡内酯和5"-羟基-8-甲氧基异欧前胡内酯。2.肠内菌法:在肠内菌药品溶液中未发现蛇床夫内酯的代谢产物。结论:微生物转化和肠内菌法可用来研究香豆素类化合物的体外代谢,为进一步研究白芷的代谢途径提供依据。第三部分液质联用法同时测定大鼠血浆中蛇床夫内酯及其代谢产物目的:建立一种用LC-MS法测定大鼠口服灌胃蛇床夫内酯后血浆中蛇床夫内酯及其代谢产物的方法。方法:收集灌胃给予大鼠蛇床夫内酯后的血浆样品,用甲醇沉淀蛋白后进行样品分析,以0.5‰的甲酸甲醇-0.5‰的甲酸水作为流动相梯度洗脱,茴芹内酯作为内标,正离子模式下检测。结果:蛇床夫内酯及其两个代谢产物能在8 min内完全分离,在25~3200、3.91~500 ng/mL范围内线性关系良好(r≥0.9975),高、中、低三个浓度质控样品的回收率在97.4%~103.2%,样品稳定性良好,所有结果符合生物样品测定要求。结论:该方法准确,快速,灵敏,可以同时测定血浆样品中药物及其代谢物的含量;研究了药物的生物转化和代谢途径,阐明了药动学参数,为进一步研究白芷的体内代谢奠定基础。第四部分白芷有效成分蛇床夫内酯的排泄研究目的:考察香豆素类化合物蛇床夫内酯的胆汁、粪便排泄动力学,并同时测定胆汁和粪便中蛇床夫内酯的代谢物的含量,以完善蛇床夫内酯的体内代谢研究。方法:大鼠灌胃蛇床夫内酯后分别收集胆汁和粪便,样品处理后,以0.5‰的甲酸甲醇-0.5‰的甲酸水作为流动相,茴芹内酯作为内标,正离子模式下检测蛇床夫内酯及其两个代谢产物的含量,研究胆汁和粪便中蛇床夫内酯的经时变化以及转化情况。结果:经胆汁和尿液排泄动力学表明,大鼠口服蛇床夫内酯后22 h内蛇床夫内酯原形药物经胆汁排泄完全,排泄量主要集中在0~6 h,约占总排泄量的80%,经胆汁排泄的排泄总量不到总给药量1.95%;而在粪便中则需要36h以上才能排泄完全,排泄量主要集中在0~24 h,约占总排泄量的95%,但只占到总给药量的1.48%。结论:该方法可用于蛇床夫内酯及其代谢物在大鼠胆汁和粪便中的含量测定。样品处理操作简单,灵敏度高,选择性好,为进一步研究白芷在大鼠体内的排泄奠定了基础。

全文目录

摘要  5-8
ABSTRACT  8-12
引言  12-13
第一部分毛细管电泳法同时测定白芷中8 种香豆素类有效成分  13-34
  前言  13-15
  材料与方法  15-16
  结果  16-19
  附图  19-24
  附表  24-27
  讨论  27-30
  小结  30
  参考文献  30-34
第二部分白芷有效成分蛇床夫内酯的体外代谢研究  34-43
  前言  34
  材料与方法  34-37
  结果  37-39
  附图  39-41
  讨论  41
  小结  41
  参考文献  41-43
第三部分液质联用法同时测定大鼠血浆中蛇床夫内酯及其代谢产物  43-60
  前言  43-44
  材料与方法  44-48
  结果  48-51
  附图  51-54
  附表  54-55
  讨论  55-56
  小结  56-57
  参考文献  57-60
第四部分白芷有效成分蛇床夫内酯的排泄研究  60-74
  前言  60
  材料与方法  60-64
  结果  64-65
  附图  65-69
  附表  69-73
  讨论  73
  小结  73
  参考文献  73-74
结论  74-75
综述药物体内外代谢研究方法及其应用  75-92
  参考文献  84-92
致谢  92-93
个人简历  93-94

白芷的质量控制与体内外代谢研究

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