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放疗对BALB/c小鼠乳腺癌模型肿瘤微环境中Foxp3调节性T细胞（TREG）的影响的实验研究

作　者: 张伟
导　师: 蔡建辉
学　校: 河北医科大学
专　业: 外科学
关键词: CD4~+CD25~+FOXP3~+调节性T细胞肿瘤免疫治疗流式细胞术免疫组化放疗肿瘤微环境
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:在肿瘤的局部微环境中存在多种类型的免疫抑制细胞,其中CD4+CD25+Treg细胞是机体内的一种能够分泌多种细胞因子(TGF-β、IL-4、IL-10等)的调节性T细胞,对效应性T细胞具有免疫抑制作用,并且在介导肿瘤的免疫耐受和免疫逃逸中发挥重要作用。本研究拟通过观察放疗对肿瘤微环境中的CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的影响及其与放疗效果的相关性,以期为临床以清除CD4~+CD25~+Treg细胞为基础的抗肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法:进行4T1乳腺癌细胞培养,购买BALB/c小鼠,建立BALB/c小鼠荷4T1细胞(小鼠乳腺癌)模型。将培养的4T1小鼠乳腺癌细胞接种于BALB/c小鼠胸壁5-6肋间皮下(2×105细胞/只),固定小鼠四肢于平板上,将照射野缩小到略超出肿瘤大小范围,用加速电压6mV;组织剂量6000cGy;计量率500cGy/分;波长100cm的放疗剂量为小鼠肿瘤进行局部照射,每只小鼠行单次治疗,于放疗前、后4、8、12天,取肿瘤组织及肿瘤周围正常组织行石蜡包埋、切片、脱蜡、水化,应用免疫组化试剂盒,SP法行免疫组化染色,检测肿瘤组织及其周围组织内Foxp3的表达。取肿瘤组织,行200目铜网研磨制备肿瘤细胞悬液,行流式细胞染色,检测CD4+CD25+Foxp3+ Treg含量。CellQuest软件分析,以CD4+CD25+Foxp3+/ CD4+CD25+Treg的比例反映Treg的含量,观察特定放射治疗剂量下调荷瘤鼠肿瘤组织及肿瘤周围组织中Treg含量的治疗效果。结果:1瘤体和淋巴结体积及生长速度在放疗后明显下降通过每4天用游标卡尺测量肿瘤长径(a)、短径(b)、按体积(V)=πab2/6计算肿瘤体积,并计算肿瘤生长抑制率。对荷瘤小鼠的肿瘤进行局部放射治疗,分别观察放疗后4、8、12天后,肿瘤的体积大小及生长速度。结果发现,随着放疗时间的延长,放疗组与对照组相比,肿瘤的体积大小及生长速度都明显变小减慢。2放疗使肿瘤组织内Foxp3的表达水平降低于放疗前、后4、8、12天,分别取肿瘤组织及肿瘤周围正常组织进行免疫组织化学染色,检测肿瘤组织及其周围组织内Foxp3的表达。结果发现,随着天数增加,放疗前肿瘤组织中Foxp3的表达高于正常组织,放疗后的肿瘤组织与放疗前的肿瘤组织相比,Foxp3的表达水平明显下降。以上结果表明,在肿瘤组织中Foxp3的表达水平较正常组织增高,放疗可使肿瘤组织中Foxp3的表达降低。3放疗使肿瘤组织中CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg含量降低应用流式细胞染色及CellQuest软件分析,计算小鼠在制模成功后的第1天及第8天时及放疗后CD4~+CD25~+Foxp3~+/ CD4+CD25+Treg的比例,从而检测Treg的含量变化。结果发现,在荷瘤小鼠的瘤体和淋巴结内,CD4~+CD25~+ Foxp3~+Treg的水平均在制模成功后的第1天稍见升高,而制模后第8天水平明显升高。而放疗组的与荷瘤组相比,CD4~+CD25~+ Foxp3~+Treg的水平明显降低。以上结果表明,在荷瘤早期和晚期的肿瘤组织和引流的淋巴结中,CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg含量(7.07±0.35)明显增加(P< 0.05),放疗使肿瘤组织中CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg含量水平降低。结论:1瘤体和淋巴结体积及生长速度在放疗后明显下降2放疗使肿瘤组织内Foxp3的表达水平降低3放疗使肿瘤组织中CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg含量降低

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
研究论文放疗对 BALB/c 小鼠乳腺癌模型肿瘤微环境中 Foxp3 调节性T 细胞(TREG)的影响的实验研究  9-31
  前言  9-11
  材料与方法  11-16
  结果  16-18
  附图  18-24
  讨论  24-27
  结论  27-28
  参考文献  28-31
综述肿瘤免疫与调节性T 细胞  31-43
  参考文献  39-43
致谢  43-44
个人简历  44

放疗对BALB/c小鼠乳腺癌模型肿瘤微环境中Foxp3调节性T细胞（TREG）的影响的实验研究

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