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目的:急性肺损伤是一常见病和多发病,较高的病死率引起人们关注,它的发病机制到目前为止还不是十分清楚。本研究通过尾静脉注射脂多糖和气管内滴入大肠杆菌来模拟肺内外两种模型,观察这两种模型中的炎症反应有何不同,并观察小剂量糖皮质激素对这两种模型治疗效果有何不同。从而更好的指导临床中急性肺损伤的治疗。方法:清洁级雄性SD大鼠112只,按随机数字表法分为14组:尾静脉注射生理盐水1 ml对照组、尾静脉注射脂多糖( LPS 8 mg/kg ) 2h、4h、6h模型组、气管内滴入大肠杆菌标准菌株悬液( E.coli, 5.0×10~9 cfu/ml, 3 ml/kg ) 12h、24h、36h模型组,NS+Dex组及LPS 2h+Dex组、4h+Dex组、6h+Dex组、E.coli 12h+Dex组、24h+Dex组、36h+Dex干预组,每组8只动物。干预组在造模结束后立即腹腔内注射地塞米松( 2mg/kg )。10%水合氯醛腹腔注射麻醉( 3ml/kg ),股动脉放血收集血液,离心( 3000 rpm, 4℃, 10 min ),吸取上清,-80℃保存,检测血清中TNF-α的含量。开胸处死动物后,取右肺中叶测定肺的湿干比;取右肺下叶,10%中性福尔马林溶液固定,常规石蜡包埋,切片,HE染色,观察肺组织病理形态学变化并评分,经气管插管行左肺支气管肺泡灌洗,取支气管肺泡灌洗液( Bronchoalveloar lavag fluid, BALF ),离心( 1200 rpm, 4℃, 10 min ),吸取上清,-80℃保存,检测BALF中TNF-α、蛋白的含量。细胞沉淀悬浮于200μl生理盐水中,进行白细胞计数。结果:1肺组织病理形态学:光镜下观察LPS2h后开始出现肺血管充血,炎症细胞的浸润,肺间质水肿, 4h出现典型ALI的表现:透明膜形成,6h与4h病理半定量评分比较无统计学差异;在气管内滴入大肠杆菌12h后,发现大量炎症细胞浸润、气道上皮细胞的脱落,肺泡水肿,24h出现肺泡上皮细胞空泡化,坏死,细胞增殖,大量纤维蛋白的渗出,透明膜形成,部分肺实变。36h较24h病理半定量评分无统计学差异。给予激素干预后,LPS模型在2h、4h、6h可见浸润的炎症细胞减少,蛋白渗出减少,病理半定量评分也相应减少;E.coli模型在24h、36h出现炎症细胞浸润及透明膜减少,但病理半定量评分无统计学差异。2 BALF中细胞总数、蛋白含量和肺组织W/D的变化:在LPS模型中BALF中细胞计数随着时间的延长,肺泡灌洗液中细胞计数明显增多,给予激素后肺泡灌洗液中细胞计数明显下降;肺泡灌洗液中蛋白4h达高峰,6h开始下降,激素干预组同比相应下降;湿干比,在LPS组2h较对照组明显升高,但随着时间的推移,未出现统计学意义的进一步增加,激素干预组同比相应下降;在Ecoli模型中肺泡灌洗液中细胞计数,肺泡灌洗液中蛋白,湿干比,随着时间的延长,未出现统计学意义的增加,12h、24h与36h比较无统计学意义,给予激素后24h、36h均明显下降。3血清中TNF-α含量的变化:血清中TNF-α的水平,在LPS模型2h、4h、6h与NS组比明显升高,三组随着时间的延长,出现升高→高峰→降低的变化趋势。给予激素干预后,TNF-α的含量较模型组同比明显下降(P<0.01)。在Ecoli模型中12h、24h、36h与NS组比明显升高,三组随着时间的发展,同样出现升高→高峰→降低的变化趋势。给予激素后,TNF-α的含量较模型组无明显变化。4肺泡灌洗液( BALF )中TNF-α含量的变化:血清中TNF-α的水平,在LPS模型2h、4h、6h与NS组比明显升高,三组随着时间的延长,出现升:升高→高峰→降低的变化趋势。给予激素干预后较模型组同比下降( P<0.01 )。在Ecoli模型中12h、24h、36h与NS组比明显升高,三组趋势同LPS模型;给予激素干预后,较模型组无明显改善。结论:1不同时间点脂多糖和大肠杆菌诱发肺内外ALI模型均成功。2 LPS模型在4h达到典型ALI病理表现,大肠杆菌模型在24h同样达到典型表现,说明这两种模型ALI的发展过程的时间窗存在不同。3糖皮质激素的疗效与导致肺损伤的诱因密切相关。两种模型激素干预后,LPS主要表现为纤维蛋白渗出减少,肺水肿减轻。大肠杆菌主要表现为炎细胞浸润减少,纤维蛋白渗出也有所减轻,但总的病理评分并无明显改善。借以说明临床治疗中对肺内和肺外ALI应用激素的干预治疗要区别对待。4两种模型血清和BALF中TNF-α随时间改变出现相同的趋势变化,激素干预后,LPS模型血清和BALF有明显改善;大肠杆菌模型血清和BALF中基本无改善。可得出激素对内毒素导致的肺外型肺损伤治疗效果较理想,对重症感染造成的肺内型肺损伤治疗效果欠佳。
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