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长春地区孕妇弓形虫感染虫株的基因分型

作　者: 岳红霞
导　师: 向梅
学　校: 吉林大学
专　业: 临床医学
关键词: 刚地弓形虫酶联免疫吸附试验聚合酶链反应基因分型限制性片段长度多态性
分类号: R382.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内的顶复门原虫,能感染所有的恒温脊椎动物,包括哺乳动物和鸟类。刚地弓形虫在人群中广泛分布,世界上1/3的人口呈慢性感染。根据不同的环境特点和饮食习惯,血清阳性率在不同地理区域中是不同的:在欧洲,育龄期女性血清阳性率在英国为10-18%,西班牙为19-29%,意大利为40%,法国为55%。通过食用未煮熟的或生的被感染的肉(例如猪肉,羊肉)或通过猫排泄的卵囊污染的食物,水,或未洗的蔬菜而感染弓形虫。感染弓形虫常见但通常无症状,但是却对免疫受损的患者如癌症病人、艾滋病、器官移植患者等产生威胁。因为孕期病原会通过胎盘传播给胎儿,所以孕期初次和再次感染尤其对胎儿来说是高危因素。先天性弓形虫病会导致许多各种不同的临床表现,从轻微症状,视觉缺陷或视网膜脉络膜炎的形成到严重的脑积水,小头畸形,智能缺陷,甚至死亡。在南美洲和欧洲,刚地弓形虫是高度克隆的,有三种主要的系谱组成(I型,II型和III型),然而,在南美洲,分布于人群中的一些虫株呈高度多样性,这些虫株在生物学和遗传方面不同于南美和欧洲的虫株,这些显示弓形虫种群整体的多样性很高。目前,关于亚洲刚地弓形虫多样性的数据很有限。在这项研究中,多基因位点聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析被用于确定与中国人弓形虫病相关的刚地弓形虫(I型、II型、III型)不同基因型的流行情况。首先,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清样本中抗刚地弓形虫IgG抗体的水平。然后,从IgG抗体阳性孕妇外周血中提取DNA样本,通过聚合酶链反应(PCR)检测刚地弓形虫529bp重复序列。最后,用12个基因标记物包括SAG1, 5’SAG2, 3’SAG2, alt.SAG2,SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1和APICO通过多基因位点聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行刚地弓形虫分离株的基因鉴定。中国东北地区840份孕妇血清样本用间接ELISA检测抗刚地弓形虫IgG抗体水平, 80名孕妇抗刚地弓形虫IgG抗体为阳性的,血清阳性率为9.5%。从IgG抗体阳性孕妇的外周血中提取DNA样本通过聚合酶链反应用于检测529bp重复序列,33份样本为聚合酶链反应阳性。通过多基因位点聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析对阳性DNA样本进行基因分型,8个样本基因分型为II型。

全文目录

前言  4-5
摘要  5-7
Abstract  7-12
第一篇绪论  12-22
  1.1 弓形虫的流行特征  13-14
  1.2 孕妇与弓形虫感染  14-16
  1.3 弓形虫病诊断方法的研究进展  16-20
  1.4 结语  20-22
第二篇研究内容  22-58
  第一章孕妇血清弓形虫抗体IGG 的检测  22-30
    1.1 材料  22-23
    1.2 方法  23-26
    1.3 研究对象  26-27
    1.4 结果  27
    1.5 讨论  27-29
    1.6 小结  29-30
  第二章基于弓形虫529BP 高度重复序列的PCR 检测  30-38
    2.1 材料  30-31
    2.2 方法  31-34
    2.3 结果  34-36
    2.4 讨论  36-37
    2.5 小结  37-38
  第三章巢式PCR-RFLP 基因分型  38-58
    3.1 材料  38
    3.2 方法  38-42
    3.3 结果  42-55
    3.4 讨论  55-57
    3.5 小结  57-58
第三篇结论  58-59
参考文献  59-65
致谢  65

长春地区孕妇弓形虫感染虫株的基因分型

内容摘要

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