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多发性骨髓瘤来源微泡：高效促肿瘤细胞增殖新信号途径

作　者: 杨翠
导　师: 陈智超
学　校: 华中科技大学
专　业: 血液病学
关键词: 肿瘤来源微粒多发性骨髓瘤 IL-6 NF-кB ERK PI3K/AKT
分类号: R733.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究目的:多发性骨髓瘤(MM)是一种浆细胞恶性克隆性血液系统肿瘤,目前尚不可治愈,其发病机制远未明了。微泡(microversicles,MV)是多种细胞活化后或细胞凋亡后,细胞在各种应激反应下的一种产物,是一种高度异质性的亚细胞结构,肿瘤来源MV(TMV)是肿瘤细胞信息交流一种新型的极其重要的介质分子,可直接或间接辅助肿瘤细胞逃避凋亡,促进肿瘤进展。MM中是否存在MM-MV及其对MM细胞的作用均未见报道,本研究拟证实MM细胞系中是否存在MM-MV,并探讨MM-MV对MM细胞的增殖活性的影响及其分子机制。方法:以多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226和U266为研究对象,采用电镜、流式细胞术及激光共聚焦荧光显微镜等方法证实MM-MV的存在;采用MTT检测MM细胞增殖,FCM检测MM细胞周期,免疫印记法检测Ki67,研究MM-MV对MM细胞增殖的影响;采用ELISA及免疫沉淀等方法,检测IL-6、NF-кB及AKT和ERK的活性,探讨MM-MV对于MM细胞增殖能力影响的分子机制。结果:采用多种实验方法证实MM细胞分泌形态大小不一,直径约为100～1000nm的球形物,进一步证实MM中MV的来源:进一步检测球形物上Annexin-V和CD138的特征性标记,证实其表达量分别为87.2%±3.96%和76.5%±2.82 %,证实此球形物为MM-MV。进一步研究MM-MV对MM细胞的生物学作用:采用体内、外研究证实MM-MP可促进MM细胞增殖。MTT法证实:MV组MM细胞增殖能力均显著强于其余各组(P<0.001),并呈时间依赖性减弱,24h内作用最为显著。FCM检测:未见MM-MV对MM细胞周期有显著改变(P﹥0.05),不同时间点的MV组均较同水平CON组Ki67表达量增加(P<0.05)。体内实验证实:MM-MV组成瘤时间较MM组短(P<0.05),MM-MV组和MM组肿瘤中位生成时间分别为:15d, 21d;测量裸鼠荷瘤的肿瘤体积:MM-MV组和MM组分别为:14.97+11.76mm3,6.43+ 2.51mm3。ELISA法证实:RPMI8226细胞与MM-MV作用6h、12h、24h后MV组较CON组显著提高IL-6的表达水平(P<0.01),U266细胞在与MM-MV共培养6h、24h后MV组较con组提高IL-6的表达水平(P<0.01)。Western Blot检测P65、IкB的水平,结果发现12h、24h后MV组较CON组IкB表达减少,P65表达增加,具有统计学差异(P<0.05)。进一步探讨:MM-MV对于MM细胞p-AKT/AKT、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白的表达影响。证实:MM-MV处理RPMI8226细胞24h后p-AKT/AKT及p-ERK1/2/ERK1/2较CON组活性增加,但以p-ERK1/2/ERK1/2的活性提高为主(P<0.05),U266细胞MV组较CON组p-AKT/AKT、p-ERK1/2/ERK1/2降低(P<0.05)或略微增加(P﹥0.05)。研究证实MM-MV可促使K562、Jurkat、HL-60及PBMC细胞增殖,其中RPMI8226来源MV可显著促进各细胞系增殖,具有统计学意义(P<0.001),U266来源MP对PBMC、Jurkat的增殖具有统计学意义(P<0.001),而K562、HL-60增殖能力较低(P>0.05)结论:MM中存在MM-MV,并且能显著诱导增殖蛋白KI67表达上调,促进MM细胞的增殖,是MM细胞间作用的一种新途径和MM疾病进展的新机制。MM-MV促增殖作用与MM细胞IL-6分泌、NF-кB活性、ERK和AKT通路等均可能有关,其具体分子机制有待深入研究。

全文目录

英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-12
前言  12-14
材料与方法  14-28
结果  28-40
讨论  40-46
参考文献  46-50
小结  50-51
综述  51-65
  References  59-65
致谢  65

多发性骨髓瘤来源微泡：高效促肿瘤细胞增殖新信号途径

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