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白藜芦醇对神经元钙信号和葡萄糖利用的影响及机制

作　者: 张俊琦
导　师: 陈建国
学　校: 华中科技大学
专　业: 药理学
关键词: RSV 皮层神经元胞内钙信号通路 AMPK 葡萄糖利用囊泡释放
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

第一部分白藜芦醇对皮层神经元胞内钙离子水平的影响及机制目的:白藜芦醇(resveratrol, RSV)普遍存在于红葡萄酒,花生,石榴等植物中。大量研究表明RSV有着极高的应用价值,尤其在抗氧化,调节能量代谢,神经保护,抗衰老等方面。RSV能使多种神经细胞的胞内钙增加,对细胞的很多功能具有调节作用。然而关于RSV影响神经元胞内钙离子水平,尤其是对皮层神经元的影响的作用机制尚不清楚,本实验主要探讨RSV对原代培养皮层神经元的胞内钙离子水平的影响及作用机制。方法:采用钙影像技术,观察不同浓度的RSV对原代培养皮层神经元胞内钙离子水平的影响,并用多种工具药观察RSV升高皮层神经元胞内钙水平的作用机制。结果:RSV浓度依赖性增加皮层神经元胞内钙离子水平,5μM、10μM、50μM和100μM的RSV增加胞内钙的幅度分别为42.30±0.53 %, 138.30±1.19%, 200.88±8.19 %和365.18±5.48 %。雌激素受体,NOS,GC和PKG抑制剂ICI182780 (10μM),L-NAME(100μM),ODQ (20μM)和KT5823 (10μM)能部分取消RSV升高胞内钙的作用。并且,AC和PKA抑制剂SQ22536 (100μM)和H89 (20μM)也能部分取消RSV升高胞内钙的作用。结论:RSV通过激活ER-NOS-GC-PKG和AC-PKA信号通路调节皮层神经元胞内钙水平,而SIRT1和AMPK对其调节作用并无明显影响。第二部分白藜芦醇对皮层神经元葡萄糖利用的影响及机制目的:胞内钙水平在调节能量代谢尤其是葡萄糖的利用方面起着重要的作用。本实验主要研究RSV对皮层神经元葡萄糖利用的影响及其作用机制。方法:首先利用Western bloting技术观察RSV对AMPK及其信号通路激活的影响,然后应用300μM NBDG(一种带荧光的葡萄糖的衍生物)预孵育皮层神经元,再分别给予BAPTA-AM(胞内钙鳌和剂),Compound C(AMPK抑制剂),BFA(囊泡释放抑制剂),利用双光子显微镜观察在给予不同抑制剂后RSV对NBDG荧光强度的变化情况;最后,观察了预先给予FM1-43(一种间接监视囊泡释放过程的染料),RSV对囊泡释放的影响及其机制。结果:RSV快速激活AMPK和增强囊泡释放作用是钙依赖的。10μM RSV增加NBDG的荧光强度能被10μM BAPTA-AM,100μM compound C和BFA取消。结论:RSV增强钙依赖的囊泡释放作用和激活钙依赖性的AMPK参与了神经元的葡萄糖利用,但AMPK并未参与RSV的增强囊泡释放作用。

全文目录

缩略词  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-14
  参考文献  12-14
第一部分白藜芦醇对皮层神经元胞内钙离子水平的影响及机制  14-28
  材料与方法  14-17
  结果  17-24
  讨论  24-25
  参考文献  25-27
  小结  27-28
第二部分白藜芦醇对皮层神经元葡萄糖利用的影响及机制  28-39
  材料与方法  28-32
  结果  32-35
  讨论  35-36
  参考文献  36-38
  小结  38-39
全文总结  39-42
综述  42-64
  参考文献  54-64
致谢  64

白藜芦醇对神经元钙信号和葡萄糖利用的影响及机制

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