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LIF（白血病抑制因子）在小鼠慢性高眼压模型中对GAP-43（生长相关蛋白-43）表达影响的实验研究

作　者: 高雄伟
导　师: 李冰
学　校: 山西医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 慢性高眼压模型 RGCRGCs GAP-43
分类号: R775
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：在构建小鼠慢性高眼压模型的基础上，观察白血病抑制因子(Leukemiainhibitory factor, LIF)对生长相关蛋白-43 (growth associated protein-43，GAP-43)在小鼠眼视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）及其他部位中的表达影响，探讨其对小鼠慢性高眼压模型中视网膜神经节细胞的保护作用，为临床治疗RGCs呈慢性丧失且病因不清的疾病（如青光眼、视网膜色素变性等）提供一种有效的辅助方法。方法：将60只正常无眼疾昆明小鼠(60只眼)随机分为正常对照组（20只小鼠，20只眼）慢性高眼压组(20只小鼠，20只眼)、LIF治疗组（20只小鼠，20只眼）。每组根据治疗后观察时间分为用药前，用药后1天、7天、14天4个小组（每小组5只小鼠，5只眼）。采用烧灼小鼠巩膜表层的房水引流静脉建立小鼠慢性高眼压模型，于模型成功后（眼压稳定升高1周后）向小鼠玻璃体腔内注射0.5ul/g LIF。分别于用药前，用药后1天、7天、14天摘除眼球，固定、石蜡包埋、切片，进行HE染色及免疫组织化学染色。普通光学显微镜下观察视网膜形态变化，应用医学图像分析系统对进行RGCs量化及GAP-43表达的灰度分析，进行统计学处理。结果：1.眼压变化：治疗组与慢性高眼压组在用药前及用药后即刻观察小鼠眼压相较差异无显著性（P>0.05）而相较于正常对照组增高，治疗组在随后1天、7天、14天比慢性高眼压组眼压降低，但并不明显，较正常对照组眼压仍高，差异有显著性（P<0.05）。2.组织形态观察：慢性高眼压组织学变化早期为视网膜神经纤维层、内丛状层水肿。晚期视网膜内层水肿消退，萎缩、变薄，视网膜神经节细胞数目减少。治疗组相较于慢性高眼压组水肿消退较快，萎缩不明显，视网膜神经节细胞数目减少不明显。3.RGCs计数结果：治疗组与慢性高眼压组在治疗前及治疗后1天观察RGCs数目相比较差异无显著性（P>0.05）而相较于正常对照组数目减少，慢性高眼压组在随后7天、14天比治疗组RGCs数目减少明显，差异有显著性（P<0.05）。但治疗组较正常对照组数目仍少，差异有显著性（P<0.05）。4.免疫组织化学观察：GAP-43表达于各组视网膜神经纤维层、RGCs、以及内丛状层上。通过灰度分析比较，慢性高眼压组早期可见GAP-43的表达增加，随后表达逐渐减少，晚期接近正常；而治疗组早期即可见GAP-43的表达增加，且在观察期内稳定增加，且各期间相较差异有显著性（P<0.05）。结论：1.病理学及眼压改变显示小鼠慢性高眼压模型建模成功。2.LIF在小鼠慢性高眼压模型中促进GAP-43的表达增加。3.LIF对小鼠慢性高眼压模型中视网膜神经节细胞具有保护作用。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
英文缩写词  9-10
前言  10-12
材料与方法  12-18
  1.1 实验动物及分组  12
  1.2 主要仪器设备及试剂  12-14
    1.2.1 主要实验仪器  12-13
    1.2.2 主要试剂  13-14
  1.3 小鼠慢性高眼压模型制作  14
    1.3.1 小鼠慢性高眼压模型制作过程  14
    1.3.2 模型纳入剔除标准  14
  1.4 LIF 玻璃体腔内注射  14-15
  1.5 石蜡切片的制备  15
  1.6 普通 HE 染色及光学显微镜观察  15-16
    1.6.1 普通HE 染色  15-16
    1.6.2 光学显微镜观察  16
  1.7 免疫组织化学染色及分析  16-17
    1.7.1 免疫组织化学染色  16
    1.7.2 免疫组化分析  16-17
  1.8 统计学分析  17-18
结果  18-21
  2.1 观察期眼压  18
  2.2 常规病理组织切片观察  18-19
    2.2.1 正常对照组  18-19
    2.2.2 慢性高眼压组和LIF 组  19
  2.3 视网膜神经节细胞计数结果  19
  2.4 免疫组织化学切片观察  19-21
讨论  21-25
  3.1 慢性高眼压模型  21
  3.2 青光眼的视神经损伤和保护  21-22
    3.2.1 青光眼的视神经损伤机制  21-22
    3.2.2 神经营养因子对青光眼的视神经保护  22
  3.3 L IF 与GAP-43 及视神经保护  22-25
    3.3.1 白血病抑制因子的生理特点和作用机制  22-24
    3.3.2 LIF 与 GAP-43 及视神经保护  24-25
结论  25-26
参考文献  26-29
附图  29-32
综述  32-39
  参考文献  37-39
个人简历  39-40
致谢  40

LIF（白血病抑制因子）在小鼠慢性高眼压模型中对GAP-43（生长相关蛋白-43）表达影响的实验研究

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