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食管癌组织中神经纤维分布的形态学研究及SP/NK1-R信号对Eca9706细胞的促生长作用

作　者: 同李平
导　师: 张洪伟
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: 食管鳞癌 GAP-43 SP/NK1-R 免疫组化免疫荧光双标
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨食管鳞癌组织中神经纤维的分布情况和P物质及其受体NK1-R拮抗剂L733060对食管鳞癌细胞的抑制作用。方法:应用免疫组化ABC法,检测手术切除的食管鳞癌组织内S100、GAP-43、PGP9.5、CGRP、SP、ERK1/2阳性神经纤维的分布情况,并分析其与患者临床病理参数的关系;免疫荧光双标法检测食管鳞癌组织中GAP-43和SP免疫阳性神经纤维;免疫组化、Western Blot、real time RT-PCR检测食管鳞癌组织和细胞系Eca9706中SP受体NK1-R的表达情况及ERK1/2、Bax/Bcl-2的蛋白表达变化;MTT法检测癌细胞增殖;流式细胞仪检测癌细胞凋亡;应用统计学软件SPSS16.0进行统计学分析。结果:相对于正常组织,食管鳞癌组织中存在相当数量的S100及GAP-43阳性神经纤维(束)不规则地分布于肿瘤细胞之间,且S100阳性纤维密度大于GAP-43阳性纤维密度,统计分析显示肿瘤组织中GAP-43阳性再生神经纤维密度与患者的肿瘤大小、淋巴结转移相关(P<0.05)。荧光双标结果显示癌组织中的神经纤维分布主要有三种类型:GAP-43阳性而SP阴性(48%),代表再生的神经纤维但不能分泌SP;GAP-43阴性而SP阳性(28%),代表SP能神经纤维,有可能是癌组织包裹原来就存在的神经纤维;GAP-43和SP双阳性(24%),代表再生的且能分泌SP的神经纤维。食管鳞癌组织和细胞系均表达SP受体NK1-R,纳摩尔每升浓度的P物质可以显著提高Eca9706细胞的增殖能力,伴随NK1-R及pERK1/2表达增高;NK1-R拮抗剂L733060可以诱导细胞凋亡,具有体外抑瘤作用,表现为pERK1/2表达明显降低、Bax/Bcl-2比例增高。结论:食管鳞癌组织中存在再生神经纤维分布,其中部分为SP能神经纤维;食管鳞癌组织和细胞NK1-R表达升高,NK1-R拮抗剂L733060能够通过诱导凋亡起到抑制肿瘤生长的作用。SP/NK1-R信号可作为潜在的食管鳞癌治疗靶点。

全文目录

缩略语表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-13
文献回顾  13-35
  第一部分正常食管的神经支配和神经纤维损伤修复  13-18
  第二部分肿瘤神经支配的发现和研究进展  18-35
实验一 GAP-43 阳性神经纤维分布的免疫组化研究  35-44
  1 材料和试剂  35-36
  2 方法  36-38
  3 结果  38-41
  4 讨论  41-44
实验二癌组织内神经纤维的性质鉴定  44-50
  1 材料和试剂  44
  2 方法  44-45
  3 结果  45-48
  4 讨论  48-50
实验三 SP 及其受体NK1-R 在食管癌中的表达和作用  50-59
  1 材料和试剂  50-51
  2 方法  51-54
  3 结果  54-57
  4 讨论  57-59
小结  59-60
参考文献  60-79
个人简历和研究成果  79-80
致谢  80

食管癌组织中神经纤维分布的形态学研究及SP/NK1-R信号对Eca9706细胞的促生长作用

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