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抗菌肽P12、P7的设计及体外抗菌作用的研究

作　者: 韩荣波
导　师: 梁宁生
学　校: 广西医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 抗菌多肽合成肽杀菌活性影响因素抗生素联用
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:根据已知抗菌肽的结构特点,设计合成出具有抗菌作用的多肽,并对它们的抗菌作用进行研究。观察在不同影响因素下,合成肽的杀菌效果,并研究抗菌合成肽与临床常用抗生素相互作用的效果,为开发新型抗菌药物提供参考信息。方法:(1):从美国国家生物工程信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)网站的基因库(GenBank)分别获取来源于牛白细胞的13肽Indolicidin,来自于昆虫细胞的21肽thanatin,来自于表皮葡萄球菌的31肽epilancin和来自于仓鼠白细胞的33肽Defensins(防御素)共4种具有代表性的天然抗菌多肽氨基酸顺序,并以其作为设计合成抗菌多肽的参考模板,它们在结构上的共同点:(1)这些多肽分子都带净正电荷(碱性),氨基酸组成中,没有酸性氨基酸残基,有相对较多的碱性氨基酸残基,其碱性氨基酸为5个占序列的41.7%。(2)这4条模板多肽,除了第一条多肽只有单个相连碱性氨基酸残基,其余至少有2个相连碱性氨基酸残基;(3)都具有至少1个单个碱性氨基酸残基。我们根据这一共同点,设计了长度为12个氨基酸残基的多肽,简称P12,其序列为(FYRKMFCKGKKP),7个氨基酸的多肽,简称P7,其序列为(KRKKRKK)。设计完毕后由上海波泰生物公司合成。(2):杀菌活性测定:将不同药物浓度的氨基酸合成肽与临床常见革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌、真菌及耐药菌恒温37℃共同水浴2h,之后加入LB营养琼脂培养皿中,37℃过夜培养18-20h,计算每一块LB营养琼脂培养皿上菌落形成数(CFU),与对照组相比较,计算出每条合成肽对细菌的杀菌率。(3):对其中杀菌活性较强的合成肽进行杀菌活性影响因素(PH值、Ca2+、Mg2+)测定。(4):将合成肽和抗菌药物分别单独以及联合作用于金黄色葡萄球菌,利用琼脂铺板技术法计算多肽杀菌率,以评价联合使用的杀菌效果。结果:(1):两种抗菌合成肽对同属革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、枯草杆菌具有较强的杀菌作用,共同作用2h后,两种抗菌合成肽的MBC范围在8-400ug/ml。两种抗菌合成肽对同属革兰氏阴性细菌杀菌效果较弱,P12、P7与大肠杆菌共同作用2h后MBC范围为400-1200ug/ml,对变形杆菌、绿脓杆菌作用2h后MBC>1200ug/ml,相对较弱。P12对耐药金黄色葡萄球菌及耐药大肠杆菌杀菌作用较强,作用2h后MBC为400ug/ml,对白色念珠菌无任何杀菌作用。(2):合成肽杀菌活性受培养液PH值影响, PH值为5.0;7.4;9.0时,P7对炭疽杆菌杀菌率为:77.6%、99.9%、98.2%。在2-15mmo1·L-1Ca2+,1-70mmo1·L-1Mg2+,最适于合成肽P7发挥杀菌活性。(3):磷霉素钠、左氧氟沙星可加强P12的杀菌活性,红霉素对于P12杀菌活性无影响。结论:1:根据天然抗菌肽序列设计合成的抗菌肽对革兰氏阳性菌具有较强杀菌活性,对临床上常见耐药金黄色葡萄球菌、大肠杆菌也有强杀菌作用。2:合成肽杀菌活性受PH值、Ca2+、Mg2+影响。可以推测其杀菌活性与细胞膜上的阴离子相关。3:合成抗菌多肽P12与具破坏细胞壁功能及抑制细菌DNA合成的抗生素具有相加作用。

全文目录

一：论文  4-44
  1. 中英文缩略表  4-5
  2. 中文摘要  5-7
  3. 英文摘要  7-10
  4. 前言  10-12
  5. 实验材料和方法  12-18
  6. 实验结果  18-30
  7. 讨论  30-37
  8. 结论  37-38
  9. 参考文献  38-44
二：综述  44-64
  1. 综述内容  44-58
  2. 参考文献  58-64
三：附录  64-65
  1. 在读研究生期间撰写发表论文  64-65
四：致谢  65

抗菌肽P12、P7的设计及体外抗菌作用的研究

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