学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

应用组织工程技术提高脂肪前体细胞存活率的研究

作　者: 沈辉
导　师: 徐靖宏
学　校: 浙江大学
专　业: 整形外科
关键词: 前体细胞脂肪滴组织工程细胞存活率脂肪组织脂肪细胞透明质酸增殖潜能 VEGF 支架材料种子细胞小鼠成脂肪分化细胞分化生物相容性传代培养移植物自体脂肪大分子网状结构实验研究
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 21次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

背景：自体脂肪组织作为人体组织的填充材料被广泛的运用。虽然脂肪组织在人体内来源相对丰富,但大量的脂肪组织移植来源仍然受限。所以具有分化、增殖潜能的脂肪干细胞和脂肪前体细胞作为脂肪组织工程的种子细胞引起了关注。脂肪前体细胞是从脂肪组织分离出的脂肪干细胞分化出的早期脂肪细胞,通过诱导具有分化增殖的潜能。外源性血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)可促进移植组织内的血管增生和脂肪细胞分化增殖,但外源性VEGF需要持续作用于组织才能起到较好效果。透明质酸钠(HA)是葡糖醛酸-N-乙酰氨基葡糖为双糖单位组成的直链高分子多糖,广泛存在于组织细胞基质中；具有优良的生物相容性和生物可降解性。HA的大分子网状结构通过与水形成氢键可结合大量的水,可以维持局部VEGF浓度,同时其独特的三维结构使之成为理想的种子细胞的支架材料。目的：以透明质酸支架为载体,复合小鼠脂肪前体细胞、VEGF植入小鼠体内,通过检测组织血管形成脂肪分化情况,评价该复合载体材料对脂肪前体细胞移植存活率的影响。方法：将小鼠3T3-L1脂肪前体细胞复苏、传代培养后,以脂肪分化诱导剂诱导8天。然后分为4组注射入小鼠皮下：实验组(诱导后脂肪细胞、PBS缓冲液、透明质酸、VEGF)、HA对照组(诱导后脂肪细胞、PBS缓冲液、透明质酸)、VEGF对照组(诱导后脂肪细胞、PBS缓冲液、VEGF)和空白组(诱导后脂肪细胞、PBS缓冲液)。术后2,4,8周取材,仔细剥离取出移植物,观察色泽、质地。电子天平测量质量。标本分别进行HE组织染色和苏丹Ⅲ染色。体外PCR实验检测。结果：8周取材见小鼠背部皮下脂肪组织淡黄色,质软,容易剥离。实验组、,HA对照组均取到标本。HE染色切片表现为移植物外周为纤维包膜,空白对照组可见部分坏死脂肪细胞,炎性细胞浸润。脂肪细胞大小不一,存活较少。实验组存活脂肪细胞较多,坏死灶较少,细胞较大排列均一,可见微血管生长。苏丹Ⅲ染色可见对照组红染脂肪较少,排列不规则,大小不一,有局部纤维化。实验组红染然脂肪较多,坏死灶较少,细胞较大排列均一。应用SPSS 16.0软件对2周,4周,8周各组重量进行方差分析,2周、4周VEGF对照组与空白组无统计学差异,其余各组均有统计学差异。8周实验组与其他三组有统计学差异,三组间没有统计学差异。体外PCR实验结果提示各组PPAR-γ、C-EBPα条带密度均相近。说明在体外各组表达无明显差异。结论：应用组织工程技术,以透明质酸支架复合小鼠3T3-L1脂肪前体细胞、VEGF注射充填可以延长VEGF持续作用时间,促进新生脂肪组织血管形成,提高小鼠脂肪前提细胞诱导后移植的存活率。

全文目录

致谢  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-8
缩写、符号清单、术语表  8-11
第1章绪论  11-16
  1.1 组织工程填充材料  11-12
  1.2 脂肪前体细胞  12-13
  1.3 血管内皮生长因子(VEGF)  13-14
  1.4 研究内容、目标及创新  14-16
第2章前体细胞的培养和诱导  16-22
  2.1 实验材料  16-17
  2.2 主要仪器设备  17-18
  2.3 实验方法  18-19
  2.4 实验结果  19-22
第3章小鼠移植模型建立  22-27
  3.1 实验材料  22-23
  3.2 主要仪器设备  23
  3.3 实验方法  23-27
第4章标本组织染色  27-31
  4.1 标本取材  27
  4.2 主要试剂及仪器  27
  4.3 实验方法  27-28
  4.4 实验结果  28-31
第5章 RT-PCR  31-36
  5.1 细胞分组  31
  5.2 主要试剂及仪器  31-33
  5.3 实验方法  33-35
  5.4 实验结果  35-36
第6章脂肪存活和血管生长分析  36-40
  6.1 标本质量统计学检验  36-37
  6.2 微血管计数及统计学检验  37-40
第7章讨论  40-43
第8章结论  43-44
参考文献  44-46
综述  46-56
  参考文献  52-56
作者简历  56-57

应用组织工程技术提高脂肪前体细胞存活率的研究

内容摘要

全文目录

相似论文