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游离SiO_2粉尘体外诱转肺成纤维细胞抑制筛选

作　者: 张光辉
导　师: 姚武
学　校: 郑州大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: RGD 秋水仙碱干扰素-a 甲磺酸伊马替尼二氧化硅肺成纤维细胞胶原蛋白
分类号: R135.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

矽肺是机体吸入大量含有游离SiO2粉尘引起的肺部疾病。大多数矽肺的发生是一个慢性过程,主要伴随着大量的矽性蛋白沉积。其病理特征为肺泡腔内有大量的蛋白分泌物,随后可伴有纤维组织弥漫增生,形成小纤维灶乃至矽结节。成纤维细胞在其中起到重要作用。游离SiO2粉尘能够激活肺成纤维细胞,成纤维细胞激活后表达a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)转化为肌成纤维细胞,能够大量分泌细胞外基质,尤其是胶原纤维,是肺部蛋白沉积的主要因素。因此,抑制肺成纤维细胞的激活,抑制其蛋白的分泌,尤其是胶原蛋白的分泌是抑制矽肺发生发展的重要环节。通过体外分离培养SD大鼠肺巨噬细胞、肺成纤维细胞。应用游离SiO2粉尘刺激巨噬细胞后取培养上清诱转肺成纤维细胞,研究RGD短肽、秋水仙碱、干扰素a-1b和甲磺酸伊马替尼对诱转后肌成纤维细胞的抑制作用,为进一步对肺纤维化的治疗研究提供参考依据和基础资料。目的：观察RGD短肽、秋水仙碱、干扰素-a1b和甲磺酸伊马替尼对游离SiO2刺激引起的肺成纤维细胞激活效应的体外抑制作用。寻求合适的肺肌成纤维细胞的抑制剂。方法：1用无血清的游离SiO2粉尘培养基刺激巨噬细胞(AM)24 h,收集培养液上清并离心去除SiO2, SiO2组用收集所得的上清培养肺成纤维细胞(LF)；正常组用无游离SiO2粉尘刺激的AM上清培养LF。受游离SiO2粉尘刺激的AM上清培养基中加入RGD短肽、或秋水仙碱、或IFN-a1b、或IM,培养LF24 h。2应用MTT实验测定细胞的活性；应用real-time PCR检测a-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA水平；应用ELISA法测定COLⅠ和COLⅢ的分泌；BradFord定氮法用来测定培养上清中的总蛋白。结果：1 RGD对游离SiO2粉尘诱转LF的活性,各RGD浓度组与SiO2组差异没有统计学意义。各RGD浓度组的a-SMA、COLⅠ、COLⅢ的mRNA和蛋白分泌水平均低于SiO2组,其中在100μg/ml和150μg/ml浓度组时,差异均有统计学意义(P<0.05)。2秋水仙碱对诱转LF的活性,各秋水仙碱浓度组低于SiO2组,差异有统计学意义(P<0.05),LC25是40μmol/L。各秋水仙碱浓度组的a-SMA、COLⅠ和COLⅢ的mRNA水平低于SiO2组,其中在80μmol/L浓度组时,差异均有统计学意义(P<0.05)。各秋水仙碱浓度组的COLⅠ和总蛋白的分泌水平低于Si02组,其中COLⅠ和总蛋白在80μg/ml浓度组时,差异有统计学意义(P<0.05)。3IFN-a1b对诱转LF的活性,差异有统计学意义(P<0.05),LC25是100 u／ml。各IFN-a1b浓度组的a-SMA、COLⅠ、COLⅢ的mRNA和蛋白分泌水平均低于Si02组,其中在100u/ml浓度组时,差异均有统计学意义(P<0.05)。4 IM对诱转LF的活性,差异有统计学意义(P<0.05),LC50是5μmol／L。各IM浓度组的a-SMA、COLⅠ和COLⅢ的mRNA水平低于Si02组,其中在5μmol／L浓度组时,差异均有统计学意义(P<0.05)。各IM浓度组的COLⅠ、COLⅢ和总蛋白的分泌水平低于Si02组,其中COLⅠ和COLⅢ在5μmol/L浓度组时差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1秋水仙碱、干扰素-alb和IM抑制了肌成纤维细胞的活化。2 RGD、秋水仙碱、干扰素-alb和IM能够抑制肌成纤维细胞的COLⅠ、COLⅢ等细胞外基质的表达。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-11
图和附表清单  11-12
中英文缩略词表  12-13
论文部分  13
1 前言  13-16
  1.1 目的和意义  13-14
  1.2 选题背景和问题提出  14-15
  1.3 研究方法和论文结构  15-16
2 材料与方法  16-31
  2.1 材料  16-20
  2.2 实验方法  20-31
3 结果  31-41
  3.1 体外培养的巨噬细胞、成纤维细胞形态观察  31-33
  3.2 选用的抑制剂对肌成纤维细胞的抑制效应  33-41
4 讨论  41-48
  4.1 RGD短肽对SiO_2致肺成纤维细胞激活的抑制效应  41-43
  4.2 秋水仙碱对SiO_2致肺成纤维细胞激活的抑制效应  43-44
  4.3 IFN-α 1b对SiO_2致肺成纤维细胞激活的抑制效应  44-45
  4.4 甲磺酸伊马替尼对SiO_2致肺成纤维细胞激活的抑制效应  45-46
  4.5 RGD、秋水仙碱、IFN-α 1b和IM对成纤维细胞作用的比较  46-48
5 结论  48-49
6 参考文献  49-55
综述部分  55-67
  参考文献  61-67
个人简历  67-69
硕士研究生期间发表论文  69-70
致谢  70

游离SiO_2粉尘体外诱转肺成纤维细胞抑制筛选

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