学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

农杆菌介导的Ac/Ds转座系统转化甘蓝型油菜的研究

作　者: 徐娟
导　师: 黄进勇
学　校: 郑州大学
专　业: 生态学
关键词: Ac/Ds转座子甘蓝型油菜转化 PCR鉴定
分类号: S565.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 37次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

突变体是指某个基因发生变异或某个性状发生可遗传变异的材料,我们可以利用这些突变材料来分离和鉴定基因的功能油菜是世界上最重要的油料作物之一,长期以来对其研究的主要目标就是要阐明控制其重要农艺性状的遗传基础并克隆相关基因。但近年来有关构建油菜突变体库的研究却鲜见报道,这无疑阻碍了油菜功能基因组学的发展。为开展油菜功能基因组学研究使得大规模构建油菜突变体库显得日益迫切。自玉米Ac/Ds转座子系统发现以来,已经被成功应用于水稻、拟南介、番茄、烟草等多种异源植物进行基因的分离与克隆。利用Ds因子可以在Ac转座酶的作用下发生跳跃的特性,探索将此系统应用在油菜中来构建突变体库,为研究油菜基因功能提供研究材料。近十年来,油菜在转基因方面取得了重大进展,油菜的转基因研究和分子克隆取得了令人瞩目的成就,使油菜的品质和种质资源得到改良。农杆菌介导法是油菜遗传转化最常用的方法,它是一种纯生物的天然转基因方法,操作简单,成本低,使它成为目前应用最广泛的遗传转化方法之一。本研究利用农杆菌介导法将含有Ac元件的质粒pUbiAc及含有Ds元件的质粒pDsBar1300分别转化甘蓝型油菜中双6号的子叶柄与下胚轴,经过筛选、生根、驯化、移栽,分别获得了10株转化Ac的卡那霉素抗性植株和28株转化Ds的潮霉素抗性植株。PCR检测发现,在10株Ac转化植株中有1株为阳性苗,阳性率为10%；在28株Ds转化植株中有21株阳性苗,阳性率为75%。该结果为我们下一步构建油菜突变体群体及开展油菜功能基因组学研究将可能开辟一个新的途径。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-11
引言  11-12
第一章文献综述  12-26
  第一节 Ac/Ds转座子系统及其在油菜中应用的策略改进  12-21
    1 构建突变体方法  12
    2 Ac/Ds转座子系统概述  12-21
      2.2 Ac/Ds转座子系统在异源植物中的应用  14-15
      2.3 转座子标签法  15-16
      2.4 Ac/Ds转座子系统载体的构建策略  16-17
        2.4.1 一元转座子系统  16
        2.4.2 二元转座子系统  16-17
      2.5 Ac/Ds转座子系统用于构建油菜突变体的策略改进  17-21
      2.6 Ac/Ds转座子系统在油菜功能基因组研究中的应用前景  21
  第二节农杆菌介导的油菜遗传转化  21-26
    1 农杆菌转化机理及优点  21-23
    2 转化方法  23-24
      2.1 原生质体与农杆菌共培养法  23
      2.2 整株感染法  23-24
      2.3 叶盘转化法  24
    3 根癌农杆菌介导的油菜基因转化研究进展  24-26
      3.1 转化过程中的影响因素  24-26
第二章农杆菌介导的Ac/Ds转座子转化甘蓝型油菜及其鉴定  26-45
  前言  26-27
  1 材料和方法  27-35
    1.1 实验材料  27-31
      1.1.1 主要仪器设备和材料  27-28
        1.1.1.1 设备  27
        1.1.1.2 受体材料  27-28
      1.1.2 培养基  28-29
      1.1.3 试剂  29-31
        1.1.3.1 激素  29-30
        1.1.3.2 抗生素  30
        1.1.3.3 质粒DNA提取缓冲液  30
        1.1.3.4 植物基因组DNA提取液  30-31
    1.2 方法  31-35
      1.2.1 初始材料的获得  31
      1.2.2 培养条件  31
      1.2.3 油菜的遗传转化  31-32
        1.2.3.1 农杆菌的活化  31
        1.2.3.2 农杆菌介导的遗传转化及植株再生  31-32
        1.2.3.3 转化苗的生根和移栽  32
        1.2.3.4 Ac转化植株卡那霉素筛选浓度的确定  32
        1.2.3.5 Ds转化植株潮霉素筛选浓度的确定  32
      1.2.4 抗性植株的分子生物学检测  32-33
        1.2.4.1 质粒DNA的提取  32-33
        1.2.4.2 植物基因组的提取  33
      1.2.5 转基因植株的PCR检测  33-35
        1.2.5.1 PCR反应体系的建立  33-34
        1.2.5.2 对Ac转化植株进行PCR检测  34
        1.2.5.3 对Ds转化植株进行PCR检测  34-35
  2 结果与分析  35-42
    2.1 转基因流程  35-36
    2.2 Ac转化植株卡那霉素筛选浓度的确定  36-37
    2.3 Ds转化植株潮霉素筛选浓度的确定  37
    2.4 Ac转化植株筛选  37-38
    2.5 Ds转化植株筛选  38-39
    2.6 移栽前的驯化  39-40
    2.7 转基因植株检测  40-42
      2.7.1 Ac转化植株PCR检测  40
      2.7.2 Ds转化植株PCR检测  40-42
  3 讨论  42-45
    3.1 影响甘蓝型油菜中双6号转化效率的因素  42-44
      3.1.1 激素配比  42
      3.1.2 菌液浓度  42-43
      3.1.3 共培养时间  43
      3.1.4 延迟筛选  43
      3.1.5 褐化和玻璃化  43-44
    3.2 Ac/Ds转座子系统在油菜中的应用展望  44-45
第三章结论与讨论  45-47
  1 结论  45
  2 讨论  45-46
  3展望  46-47
参考文献  47-52
致谢  52-53
个人简历  53

农杆菌介导的Ac/Ds转座系统转化甘蓝型油菜的研究

内容摘要

全文目录

相似论文