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鼠源IL-1β基因的克隆、表达、活性鉴定及类风湿关节炎动物模型的建立

作　者: 郝建权
导　师: 任桂萍
学　校: 东北农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 类风湿性关节炎 IL-1β 原核表达活性鉴定 SD大鼠动物模型鸡Ⅱ型胶原
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

类风湿性关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎及对称性、破坏性的关节病变为主要特征的慢性全身性自身免疫性疾病。滑膜炎的持久反复发作,导致关节软骨及骨质破坏,最终导致关节畸型及功能障碍,血管炎可侵犯全身许多器官,引起系统性病变。半个世纪以来,人们提出多种假说来尝试解释RA,但是因为RA的发病机制过于复杂,临床上至今尚无有效的治疗药物,因此在临床上一直需要一种有效的治疗RA的药物。而研究并建立合理有效的类风湿性关节炎动物模型则是研制开发有效治疗药物和制订有效治疗措施的关键。白介素细胞-1β(IL-1β)是第一个从滑膜里发现的可以加速人体软骨破坏的细胞因子,虽然导致关节炎的病因目前并无定论。但已经有观点认为细胞因子在关节炎的长期病程中有其关键的作用,现在FDA已经批准用IL-1β的受体拮抗剂的基因方法治疗关节炎。RA是一个长期的缓慢的炎性因子介导的疾病过程,它的一个明显的特征就是不可控制的滑膜增生和丰富的炎性细胞浸润以及关节的侵蚀性浸润。在RA的发病机理中,细胞因子间的相互作用包括IL-1β,TNF-α和其它炎性因子。这些因子在激活成纤维因子和长期的关节及软骨破坏中共同起到了决定性的作用。除了参与机体免疫调节外,IL-1β在很多疾病中都发挥作用,特别是类风湿性关节炎。由于传统药物在治疗中所表现出的单一性和低效性,使人们开始倾向于开发一种能够抗细胞因子的一种新的方法来治疗类风湿关节炎。为更好的评价IL-1β抗体的药理和药效,也为了更深入的在动物实验上研究IL-1β的生物学特性,在借鉴人源IL-1β成功高效表达的基础上,本研究通过RT-PCR技术从LPS刺激过的小鼠胸腺细胞中成功克隆鼠源IL-1β成熟蛋白基因。通过pSUMO原核表达载体的重新构建,获得高效表达的具有生物活性的可溶性鼠源IL-1β蛋白,为深入研究和利用IL-1β奠定基础。本研究也成功建立了SD大鼠的鸡Ⅱ型胶原(鸡CII+CFA)关节炎动物模型。并通过一系列摸索研究,在原有模型成功建立的基础上将鸡Ⅱ型胶原与佐剂混合免疫大鼠结合腹腔注射鼠源IL-1β(鸡CII+CFA+IL-1β)制备新型的大鼠关节炎模型,这种模型从病程期上看要明显早于只注射鸡Ⅱ型胶原(鸡CII+CFA)的模型组,从炎症的严重程度上来看,也要明显高于鸡Ⅱ型胶原(鸡CII+CFA)的模型组,因此IL-1β可应用于建立RA模型,为研究RA的发病机制和研发治疗药物提供了一种新的建模方法。本研究ELISA的方法检测了所建立的模型动物血清中抗CII抗体、IL-1β、IL-17和TNF-α水平,结果表明模型动物血清中抗CII抗体、IL-1β、IL-17和TNF-α水平都有显著提高,与对照组相比差异显著(*P<0.05)。以关节炎指数、抗CⅡ抗体滴度、细胞因子水平、组织病理变化和影像学变化作为评价指标,能够对大鼠关节炎模型做出较全面的综合评价。结果表明本方法极大地丰富了RA大鼠模型制备的途径。

鼠源IL-1β基因的克隆、表达、活性鉴定及类风湿关节炎动物模型的建立

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