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经动脉灌注实现胰岛特异性表达Sirt-1并阻抗链脲霉素诱导的小鼠β细胞凋亡

作　者: 朱琴娥
导　师: 魏炽炬
学　校: 汕头大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 胰岛β细胞 Ⅰ型糖尿病动脉灌注腺病毒 Sirt1
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 45次
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内容摘要

基因治疗(gene therapy)的研究有可能为糖尿病(diabetes mellitus)治疗提供新的途径,因而受到广泛的关注。但是目前特异性地针对胰岛(pancreatic islet)组织的基因治疗方法还没有建立。本课题中,我们建立了通过腹腔干(coeliac artery)灌注腺病毒(adenovirus,Ad)载体实现小鼠胰岛细胞特异性表达外源基因。首先通过灌注含罗丹明(rhodamine)的纳米颗粒来表征胰腺组织的血供情况。然后将携带增强型绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-EGFP)通过腹腔干灌注到胰腺。实验结果表明,注射2.5X1010IU Ad-EGFP术后三天,胰腺中超过95%的胰岛及60%的β细胞表达EGFP蛋白,而胰岛中α细胞的标记不如β细胞的明显。胰管(pancreatic duct)和外分泌的腺泡(acinus)几乎没有检测到EGFP的表达。为验证该方法是否可以应用于基因治疗,通过向胰腺注射携带Sirt1(Sirtuin type 1)基因的腺病毒(Ad-Sirt1),两天后用链脲霉素(Streptozotocin,STZ)处理小鼠。分析结果表明,胰岛高表达Sirt1基因可以保护小鼠β细胞免受STZ诱导的细胞凋亡,小鼠保持正常的禁食血糖水平,且葡萄糖耐受能力得到改善。因此,本实验方法将对糖尿病治疗及胰岛生物学研究具有重要意义。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-5
英文缩略词表  5-9
第一章前言  9-18
  1.1 糖尿病及其发病情况简介  9
  1.2 糖尿病治疗的研究现状  9-10
  1.3 基因治疗  10-14
    1.3.1 基因治疗简介  10-11
    1.3.2 基因治疗在糖尿病治疗中的研究进展  11-12
    1.3.3 病毒载体在基因治疗中的应用  12-14
  1.4 小鼠胰腺组织结构及动脉血管分布情况  14-15
    1.4.1 胰腺的组织结构及发育  14
    1.4.2 小鼠胰腺组织中动脉血管的分布  14-15
  1.5 通过动脉注射腺病毒并标记胰岛细胞的可行性  15-16
  1.6 Sirt1 基因的研究现状  16-17
  1.7 本论文的目的和意义  17-18
第二章材料与方法  18-34
  2.1 主要实验试剂  18-20
    2.1.1 活体实验主要试剂  18
    2.1.2 胰岛分离纯化试剂  18-19
    2.1.3 免疫组化试剂  19-20
    2.1.4 腺病毒载体制备主要试剂  20
  2.2 实验材料  20-21
  2.3 手术器械  21
  2.4 仪器与设备  21-22
  2.5 动物  22
  2.6 主要实验方法  22-34
    2.6.1 腺病毒载体的制备  22-26
    2.6.2 动脉灌注技术  26-28
    2.6.3 STZ模型小鼠的建立  28-29
    2.6.4 小鼠胰岛分离纯化  29-30
    2.6.5 组织切片免疫荧光染色  30-33
    2.6.6 数据分析  33-34
第三章结果与分析  34-52
  3.1 小鼠胰腺血管分布分析  34-35
    3.1.1 小鼠胰腺血管分布的认识  34-35
    3.1.2 小结  35
  3.2 动脉灌注技术（C.T）的建立  35-39
    3.2.1 利用包裹罗丹明的PHA纳米颗粒表征胰腺主要供血来源  35-36
    3.2.2 免疫组化分析罗丹明纳米颗粒的分布  36-38
    3.2.3 动脉血管灌注技术的建立  38-39
    3.2.4 小结  39
  3.3 C.T与J.V方法的优越性比较  39-43
    3.3.1 术后小鼠三天后取组织荧光观察  39-40
    3.3.2 组织切片免疫荧光染色分析  40-41
    3.3.3 统计分析  41-42
    3.3.4 小结  42-43
  3.4 体内和体外实验分析α细胞的转染效率  43-45
    3.4.1 免疫组化分析体内和体外实验分析α细胞转染效率  43
    3.4.2 统计分析体内和体外实验分析α、β细胞转染效率  43-44
    3.4.3 小结  44-45
  3.5 胰岛特异性表达 Sirt1 可以保护β细胞免受 STZ 诱导的细胞凋亡  45-52
    3.5.1 动脉灌注Ad-Sirt1 病毒在胰岛中表达  45-46
    3.5.2 胰岛特异性表达外源Sirt1 可保护β细胞免受STZ诱导的细胞凋亡  46-48
    3.5.3 Ad-Sirt1/STZ小鼠胰岛的功能的检测  48-50
    3.5.4 小结  50-52
第四章讨论  52-55
  4.1 基因治疗对糖尿病治疗研究的重要性  52
  4.2 动脉灌注技术的优缺点  52-54
  4.3 动脉灌注技术的应用研究  54-55
第五章结论  55-56
参考文献  56-65
附录一试剂配方  65-68
致谢  68-69
在校期间科研情况  69
个人简历  69

经动脉灌注实现胰岛特异性表达Sirt-1并阻抗链脲霉素诱导的小鼠β细胞凋亡

内容摘要

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