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能量限制与白藜芦醇对U937泡沫细胞CD36、SIRT1、SIRT3表达影响的比较研究

作　者: 李乔
导　师: 王伟
学　校: 汕头大学
专　业: 内科学
关键词: 泡沫细胞能量限制白藜芦醇 CD36 SIRT1 SIRT3
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景动脉粥样硬化性疾病已经成为威胁人类健康的主要疾病,单核巨噬细胞源性的泡沫细胞是粥样斑块早期形成阶段的典型病变,贯穿于动脉粥样硬化疾病的发生发展。单核细胞源性泡沫细胞上的清道夫受体CD36能识别、内吞氧化型低密度脂蛋白,而氧化型低密度脂蛋白又通过诱导CD36的高表达来刺激其对本身的摄取,形成正反馈,造成胆固醇在细胞内不断积累,最终导致泡沫细胞的形成。泡沫细胞形成后,CD36高表达能诱导单核巨噬细胞向粥样斑块粘附聚集,并参与血管壁的炎症反应,引起动脉粥样硬化的进一步发展。能量限制和白藜芦醇在许多实验中已证实有一定的抗动脉粥样硬化作用,而且研究证实它们均能调节沉默信息调节因子2(Sir2)的表达,我们希望以建立单核巨噬细胞源性泡沫细胞模型为研究的切入点,初步探讨能量限制和白藜芦醇在调节泡沫细胞CD36方面的作用及有关机制。目的初步探讨能量限制(calorie restriction,CR)对于单核巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体CD36的抑制效果及调控通路以及白藜芦醇(resveratrol,Res)是否能完全模拟出CR效果及其原因所在,进行对比实验观察CR与Res对于人U937泡沫细胞CD36和长寿基因SIRT1与SIRT3 mRNA表达的影响。方法1.当人U937细胞长至1.0×10~6个/ml后,用终浓度为100ng/ml的佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和终浓度为80μg/ml的人氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激48h,油红O染色后光镜下可见细胞胞浆内存在大量的脂滴,符合泡沫细胞的形态特征,U937泡沫细胞模型建立。2.分别用含不同浓度白藜芦醇的培养基培养细胞密度为1.0×10~6个/ml的U937泡沫细胞24小时,并利用四氮唑蓝检测法(MTT)和流式细胞计数检测法(FCM)确定一个对于细胞损伤较小且效果最好的药物作用浓度。3.U937泡沫细胞模型建立后,随机分为四组:分别用高糖DMEM(泡沫细胞模型组)、低糖DMEM(CR组)、高糖DMEM加白藜芦醇(Res药物组)、高糖DMEM加白藜芦醇与尼克酰胺(Res药物对照组)四种培养基继续培养泡沫细胞48小时。4.分别提取各组细胞内mRNA,进行逆转录PCR检测,观察各组间泡沫细胞清道夫受体CD36和长寿基因SIRT1、SIRT3的mRNA表达水平情况。结果1.MTT和FCM的检测结果显示,20μM白藜芦醇是一个比较合适的药物作用浓度。2.与泡沫细胞模型组对比,CR组CD36 mRNA表达显著降低(P<0.01),Res药物组CD36 mRNA表达降低(P<0.05),Res药物对照组CD36 mRNA表达没有显著变化(P﹥0.05);与Res药物组对比,CR组CD36 mRNA表达降低(P<0.05)。3.与泡沫细胞模型组对比,CR组SIRT1 mRNA表达增加(P<0.05), Res药物组SIRT1 mRNA表达显著增加(P<0.01),Res药物对照组SIRT1 mRNA表达没有显著变化(P﹥0.05);与CR组对比,Res药物组SIRT1 mRNA表达增加(P<0.05)。4.与泡沫细胞模型组对比,CR组SIRT3 mRNA表达增加(P<0.05),Res药物组SIRT3 mRNA表达没有显著变化(P﹥0.05),Res药物对照组SIRT3 mRNA表达没有显著变化(P﹥0.05);与CR组对比,Res药物组SIRT3 mRNA表达降低(P<0.05)。结论1. CR能使U937泡沫细胞长寿基因SIRT1及SIRT3的mRNA表达水平上调,清道夫受体CD36的mRNA表达水平下调,对于泡沫细胞的发展有抑制作用。2.白藜芦醇能使长寿基因SIRT1 mRNA表达水平上调,但对SIRT3 mRNA的表达水平无显著影响,同时通过上调SIRT1的表达使U937泡沫细胞清道夫受体CD36的mRNA表达水平下调。3. CR和白藜芦醇对泡沫细胞上Sir2家族成员的调节是不同的,而且白藜芦醇对泡沫细胞上CD36的抑制作用不如CR,CR可能还存在除SIRT1以外的途径抑制CD36。

能量限制与白藜芦醇对U937泡沫细胞CD36、SIRT1、SIRT3表达影响的比较研究

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