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波纹巴非蛤糖胺聚糖抗氧化与降血脂活性研究

作　者: 董晓静
导　师: 吴红棉
学　校: 广东海洋大学
专　业: 水产品加工及贮藏工程
关键词: 波纹巴非蛤糖胺聚糖提取纯化抗氧化降血脂
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 43次
引　用: 1次
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内容摘要

波纹巴非蛤Paphia (Paratapes) undulata (Born)是南海分布广泛的一种海产贝类,本论文以波纹巴非蛤为原料,从波纹巴非蛤中提取、分离、纯化得到波纹巴非蛤糖胺聚糖,分析测定波纹巴非蛤糖胺聚糖主要化学组分含量,在此基础上对其抗氧化、降血脂活性进行初步的研究,也为有效开发和利用波纹巴非蛤资源提供理论依据,具有重要的理论意义和应用价值。主要内容与结论包括以下四个部分：1.优化波纹巴非蛤糖胺聚糖的提取工艺：在单因素试验基础上,选择提取水料比、酶解时间以及酶添加量为自变量,糖胺聚糖提取率为响应值,采用中心组合设计的方法,研究各自变量及其交互作用对糖胺聚糖提取率的影响。利用SAS和响应面分析相结合的方法,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型。优化出酶解法提取糖胺聚糖的最佳条件为：水料比2.5：1、酶解时间3.5h、酶的添加量1(g/100g)。在此条件下,糖胺聚糖提取率可达到0.413%；2.在最优条件下大量制备糖胺聚糖粗品(PUG),通过等电点除蛋白后,进行超滤脱盐获得精制品(PUG-1),并采用DEAE-52-纤维素离子交换柱层析法对精制品进行纯化,分离出来的两个级分(PUG-1a, PUG-1b),检测粗品,精制品和纯品中的糖胺聚糖及组成成分,PUG、PUG-1、PUG-1a、PUG-1b测定结果：总糖含量为16.4%、19.2%、25.4%、22.4%；总蛋白质含量为28.7%、19.8%、10.3%、9.4%；总糖胺聚糖含量为31.4%、46.7%、68.3%、62.8%：硫酸基含量为3.3%、5.6%、11.5%、15.2%;氨基半乳糖含量为3.4%、5.7%、10.7%、12.5%；己糖醛酸含量为9.5%、7.7%、15.2%、13.7%；氨基己糖含量为13.3%、20.6%、31.7%、35.1%。用高效凝胶过滤色谱(HPSEC)对纯化品进行分子量测定,两个级分分子量大约为30000Da和10000Da；采用红外光谱法分析纯品的各级分基团和结构等。得出两个极分基团吸收峰有明显的不同,第一级分主要含有的单体是吡喃单体；第二级分含有较多的硫酸基和羧基,且含有α-糖苷键特征吸收；两个极分都具有酸性多糖的特征吸收。3.体外抗氧化活性选用清除羟基自由基能力、超氧阴离子自由基能力、DPPH自由基能力三个指标。当PUG-1浓度达到6mg/mL时,对·OH的清除率最高,为55.4%；试验结果也显示,PUG和PUG-1的浓度小于5mg/mL的范围内与O2-·清除率都呈正向关系,PUG-1对O2-·清除率最高可达到68.7%；在清除DPPH自由基的试验结果表明,PUG-1浓度达到7mg/mL时,清除率最高,达到62%。可见波纹巴非蛤糖胺聚糖表现出很好的清除自由基效果。体内抗氧化试验是用D-半乳糖所致衰老模型小鼠作为实验对象,灌胃给予PUG-1 100,200,400 mg/kg-d,4周后检测其对小鼠血清、肝脏、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)含量的影响。结果表明,PUG-1对小鼠体重增长无影响；PUG-1中、高剂量组血清的SOD和CAT含量显著高于模型组(P<0.01),高剂量组小鼠血清、肝和脑组织的SOD、GSH-Px、CAT含量均显著高于模型组(P<0.01)；给药组小鼠的MDA含量低于模型组(P<0.05)。PUG-1可以剂量依赖性地提高衰老小鼠体内抗氧化能力。4.采用预防性高血脂动物模型实验方法考察波纹巴非蛤糖胺聚糖的降血脂活性,待测物PUG-1三个剂量组为100,200,400 mg/kg·d,辛伐他汀作为对照。4周后检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量和动脉硬化指数(AI)。结果发现：中剂量和高剂量PUG-1能显著降低高血脂小鼠血清TC、TG、LDL含量(P<0.01)；中剂量和高剂组能有效提高小鼠血清HDL水平(P<0.05)。结果表明波纹巴非蛤糖胺聚糖对高脂饮食所致小鼠血脂升高有明显抑制作用,有效预防高血脂症和动脉硬化危险。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-12
1 绪论  12-22
  1.1 研究背景  12-13
  1.2 多糖研究进展  13-14
    1.2.1 国内研究情况  13
    1.2.2 国外研究情况  13-14
  1.3 多糖的提取与分离纯化  14-17
    1.3.1 多糖的提取方法  14-15
    1.3.2 多糖的分离纯化  15-17
  1.4 多糖的分析方法  17-18
    1.4.1 多糖含量的测定方法  17
    1.4.2 多糖纯度鉴定  17-18
    1.4.3 多糖分子量测定  18
  1.5 多糖生理活性研究  18-20
    1.5.1 抗氧化作用  18-19
    1.5.2 降血脂活性  19-20
    1.5.3 抗氧化与降血脂的关系  20
  1.6 本论文的研究目标和内容  20-22
    1.6.1 研究目标  20
    1.6.2 研究内容  20-22
2 波纹巴非蛤糖胺聚糖提取条件的优化  22-31
  2.1 引言  22-23
  2.2 材料与仪器  23
    2.2.1 实验材料  23
    2.2.2 主要仪器设备  23
  2.3 实验设计与方法  23-25
    2.3.1 糖胺聚糖分离提取流程  23
    2.3.2 糖胺聚糖含量的测定  23
    2.3.3 标准曲线的建立  23-24
    2.3.4 单因素试验  24
    2.3.5 响应曲面法试验设计  24-25
  2.4 结果与分析  25-29
    2.4.1 单因素试验及其分析  25-27
    2.4.2 响应面试验结果与分析  27-29
  2.5 讨论  29-31
3 波纹巴非蛤糖胺聚糖纯化及理化性质研究  31-42
  3.1 引言  31
  3.2 材料与仪器  31-33
    3.2.1 试验材料  31-32
    3.2.2 主要实验仪器与设备  32-33
  3.3 试验方法  33-37
    3.3.1 DEAE-52-纤维素离子交换柱层析条件  33
    3.3.2 波纹巴非蛤糖胺聚糖的基本组成测定方法  33-36
    3.3.3 波纹巴非蛤糖胺聚糖分子量测定方法  36-37
    3.3.4 波纹巴非蛤糖胺聚糖两个极分的红外光谱检测  37
  3.4 结果与分析  37-40
    3.4.1 波纹巴非蛤糖胺聚糖DEAE-52-纤维素离子交换柱层析分离结果  38
    3.4.2 波纹巴非蛤糖胺聚糖粗品,精制品及纯化品的组成分析  38-39
    3.4.3 波纹巴非蛤糖胺聚糖柱层析后各极分的纯度  39
    3.4.4 波纹巴非蛤糖胺聚糖柱层析后各组分红外光谱分析  39-40
  3.5 讨论  40-42
4 波纹巴非蛤糖胺聚糖抗氧化活性检测  42-51
  4.1 引言  42
  4.2 材料与仪器  42-43
    4.2.1 实验材料  42-43
    4.2.2 主要仪器设备  43
  4.3 试验方法  43-45
    4.3.1 体外抗氧化活性检测  43-44
    4.3.2 体内抗氧化活性检测  44-45
  4.4 结果与分析  45-50
    4.4.1 体外抗氧化活性测定结果  45-47
    4.4.2 体内抗氧化能力测定结果  47-50
  4.5 讨论  50-51
5 波纹巴非蛤糖胺聚糖降血脂活性的研究  51-55
  5.1 引言  51
  5.2 材料与仪器  51-52
    5.2.1 试验材料  51
    5.2.2 主要仪器与设备  51-52
  5.3 试验方法  52
    5.3.1 高血脂小鼠的造模及分组处理  52
    5.3.2 降血脂测定指标与统计方法  52
  5.4 结果与分析  52-54
    5.4.1.对高血脂小鼠TC水平的影响  52-53
    5.4.2 对高血脂小鼠TG水平的影响  53
    5.4.3 对高血脂小鼠HDL、LDL水平及动脉硬化指数的影响  53-54
  5.5 讨论  54-55
6 结论与展望  55-57
  6.1 结论  55-56
  6.2 本课题尚须解决的问题  56-57
参考文献  57-64
致谢  64-65
附录  65

波纹巴非蛤糖胺聚糖抗氧化与降血脂活性研究

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