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KAP7.1、KAP8.2基因在辽宁新品系绒山羊兴盛期毛囊中的表达及分析

作　者: 汪玲
导　师: 金梅
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 辽宁新品系绒山羊 KAP7.1基因 KAP8.2基因实时荧光定量
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

羊绒是山羊的内层毛被,是次级毛囊的产物,其纤维有轻柔、光滑、细软等特点,是高档的纺织原料。绒的优良品质与组成它的结构蛋白—角蛋白和角蛋白关联蛋白有着密切的关系,其中角蛋白(Keratin, IF)在不同种绒山羊毛囊中含量和结构比较稳定,而角蛋白关联蛋白(Keratin associated protein, KAP)的含量则变化较大。为了探讨高甘氨酸/酪氨酸KAP家族基因表达与绒山羊重要经济性状—绒细度的关系,本文采用改良后的机械分离法分离兴盛期毛囊,并首次利用实时荧光定量PCR检测了KAP7.1和KAP8.2基因在辽宁新品系绒山羊初、次级毛囊中的表达情况;采用半定量RT-PCR检验KAP7.1和KAP8.2基因在心、肝、脾、肺、肾脏组织中是否表达;利用原位杂交技术对KAP7.1和KAP8.2基因在初、次级毛囊中表达进行定位。(1)实时荧光定量PCR结果显示:KAP7.1和KAP8.2基因在次级毛囊中表达均高于在初级毛囊中的表达,相对定量分析得到,KAP7.1在次级毛囊中的表达量是初级毛囊的2.28倍,而KAP8.2在次级毛囊中的表达量更高是初级毛囊的2.71倍。这两个基因在初、次级毛囊中表达程度的明显不同说明KAP7.1和KAP8.2基因差异表达是绒毛品质不同的主要原因之一,而且这两个基因均高表达于次级毛囊,因此我们推测它们对绒细度有重要的调控作用。(2)半定量RT-PCR结果显示:在辽宁新品系绒山羊的心、肝、脾、肺、肾脏组织中均未检测到KAP mRNA,说明KAP7.1和KAP8.2基因在毛囊中特异表达,在绒毛形成过程中发挥着重要作用。(3)原位杂交分析发现:KAP7.1和KAP8.2基因在初、次级毛囊的皮质层、内根鞘都有表达,表明KAP7.1和KAP8.2是组成绒山羊毛囊皮质层和内根鞘的结构蛋白之一,参与绒、毛的形成,对绒毛的生长和理化性质有重要的影响。除此之外,我们还发现KAP7.1基因在次级毛囊的毛母质有微弱的表达信号,可见KAP7.1也是次级毛囊毛母质的组成成分,KAP7.1和KAP8.2基因在辽宁新品系绒山羊毛囊中表达位置的不同,可能是造成绒毛品质差异的一个原因。本研究选在毛囊兴盛期,这个时期,KAP基因表达最强,便于深入探讨KAP基因参与绒毛形成时的动态变化,为最终了解KAP基因是如何影响绒毛品质奠定基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
1 绪论  10-22
  1.1 角蛋白及其角蛋白关联蛋白（KAP）的研究进展  10-13
    1.1.1 角蛋白及角蛋白关联蛋白的分类  10-11
    1.1.2 基因定位  11
    1.1.3 角蛋白及角蛋白关联蛋白的结构  11
    1.1.4 角蛋白及角蛋白关联蛋白的生物学功能  11-12
    1.1.5 高甘氨酸/酪氨酸KAP 的研究进展  12-13
  1.2 毛囊  13-15
    1.2.1 毛囊的结构  13-14
    1.2.2 毛囊的周期性变化  14-15
  1.3 绒山羊研究概况  15-16
    1.3.1 绒山羊品种及其特征  15
    1.3.2 我国绒山羊毛被特点  15-16
    1.3.3 绒山羊的经济价值  16
  1.4 原位杂交技术概述  16-17
    1.4.1 原位杂交技术的发展及应用  16-17
    1.4.2 探针技术的发展及应用  17
  1.5 实时荧光定量技术概述  17-20
    1.5.1 实时荧光定量PCR 技术的由来及优点  17-18
    1.5.2 实时荧光定量PCR 技术的原理  18-20
    1.5.3 实时荧光定量PCR 技术的检测方法  20
    1.5.4 实时荧光定量PCR 技术的定量方法  20
  1.6 RT-PCR 技术概述  20-21
  1.7 本研究的目的意义  21-22
2 辽宁新品系绒山羊兴盛期毛囊KAP7.1、KAP8.2 基因表达的定位分析  22-36
  2.1 实验材料  22-24
    2.1.1 样本采集  22
    2.1.2 试剂和仪器  22
    2.1.3 试剂的配制  22-23
    2.1.4 引物设计  23-24
  2.2 实验步骤  24-28
    2.2.1 玻璃器皿的预处理  24
    2.2.2 探针的制备  24-25
    2.2.3 原位杂交  25-28
  2.3 结果  28-33
    2.3.1 KAP7.1 基因原位杂交结果  28-30
    2.3.2 KAP8.2 基因原位杂交结果  30-33
  2.4 讨论  33-36
    2.4.1 KAP7.1、KAP8.2 的结构  33
    2.4.2 gKAP7.1、KAP8.2 基因的原位杂交分析  33-34
    2.4.3 原位杂交小结  34-36
3 辽宁新品系绒山羊兴盛期毛囊KAP7.1、KAP8.2 基因表达的定量分析  36-49
  3.1 材料  36
    3.1.1 试验样品采集  36
    3.1.2 主要药品和仪器  36
  3.2 实验方法  36-38
    3.2.1 分离初、次级毛囊  36
    3.2.2 初、次级毛囊RNA 提取和反转录  36-37
    3.2.3 qRT-PCR 反应  37
    3.2.4 半定量RT-PCR  37-38
  3.3 结果  38-46
    3.3.1 初、次级毛囊总RNA 提取  38-39
    3.3.2 半定量RT-PCR 检测  39-40
    3.3.3 实时荧光定量  40-46
  3.4 讨论  46-49
    3.4.1 实时荧光定量小结  46
    3.4.2 毛囊分离方法的优化  46-47
    3.4.3 绒山羊KAP7.1、KAP8.2 基因的表达  47-49
结论  49-50
参考文献  50-54
附录A 缩略词中英文对照表  54-55
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  55-56
致谢  56

KAP7.1、KAP8.2基因在辽宁新品系绒山羊兴盛期毛囊中的表达及分析

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