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脐血间质干细胞做载体转基因TNF-α诱导裸鼠胃癌细胞凋亡的实验研究

作　者: 张学彬
导　师: 毛伟征
学　校: 青岛大学
专　业: 外科学
关键词: 间质干细胞转基因肿瘤坏死因子α 裸鼠胃癌凋亡
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

[目的]：基于脐血间质干细胞(MSC)作为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)载体,研究TNF-α在胃癌间质近距离、持续、高浓度表达并观察杀伤胃癌细胞的效果。[方法]：将培养好的人胃癌细胞SGC-7901注射到15只裸鼠腹股沟皮下,建立人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型。将15只成瘤裸鼠随机分为三组,分别为：脐血间质干细胞做载体转基因TNF-α组(MSC-TNF-α组)、脐血间质干细胞组(MSC组)、生理盐水组(NaCl组),每组5只,观察14天。向三组裸鼠瘤周分别注射MSC-TNF-α、MSC及NaCl; MSC-TNF-α组和MSC组为治疗组,NaCl组为对照组。注射前后定期观察肿瘤生长情况,比较治疗末三组裸鼠移植瘤体积大小有无差别。14天后处死裸鼠,取出肿瘤组织,测量肿瘤长径、短径,求得肿瘤的体积,计算抑瘤率,并绘制肿瘤生长曲线。荧光定量RT-PCR分别测定MSC-TNF-α组、MSC组及NaCl组TNF-αmRNA基因的表达。Elisa法分别测定MSC-TNF-α组、MSC组及NaCl组TNF-α蛋白的表达。对瘤组织病理切片和常规HE染色,观察各组肿瘤内坏死面积。[结果]：至实验结束时MSC-TNF-α组、MSC组及NaCl组的移植瘤平均体积分别为(1.38±0.21) cm3、(1.80±0.23) cm3和(2.89±0.29)cm3,三组瘤体体积之间比较有显著统计学意义(P<0.001),其中MSC-TNF-α组与其它两组比较均有显著统计学意义(P<0.001); MSC-TNF-α组和MSC组荷瘤小鼠的抑瘤率分别为52.25%和37.60%。RT-PCR结果显示MSC-TNF-α组、MSC组及NaCl组均有TNF-αmRNA基因的表达,三组之间比较均有显著统计学意义。Elisa结果显示MSC-TNF-α组、MSC组及NaCl组均有TNF-α蛋白的表达,三组之间比较均有显著统计学意义。MSC-TNF-α组和MSC组瘤体坏死面积多于NaCl组,MSC-TNF-α组瘤体坏死面积多于MSC组,三组坏死面积评分之间比较有显著统计学意义(P<0.001)。[结论]：MSC-TNF-α组、MSC组及NaCl组裸鼠胃癌组织中均有TNF-α的表达。MSC-TNF-α对裸鼠胃癌细胞具有明显的杀伤作用。TNF-α和MSC能协同增加对裸鼠胃癌细胞的杀伤作用。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-7
引言  7-10
第一章材料与方法  10-18
  1.1 实验材料  10-12
    1.1.1 药物及试剂  10
    1.1.2 主要仪器  10-11
    1.1.3 实验细胞  11
    1.1.4 实验动物  11-12
  1.2 本实验技术路线图  12-13
  1.3 实验方法  13-17
    1.3.1 脐血间质干细胞做载体转基因TNF-α(MSC-TNF-α)的制备  13
    1.3.2 动物模型建立  13
    1.3.3 动物分组  13
    1.3.4 绘制肿瘤生长曲线  13
    1.3.5 荧光定量RT-PCR测定TNF-α mRNA表达  13-16
    1.3.6 Elisa法测定TNF-α蛋白的表达  16
    1.3.7 常规病理切片,HE染色  16-17
  1.4 统计学处理  17-18
第二章结果  18-20
  2.1 移植瘤生长情况  18
  2.2 RT-PCR结果  18-19
  2.3 Elisa结果  19
  2.4 肿瘤瘤体病理检查  19-20
第三章讨论  20-24
结论  24-25
参考文献  25-28
附图  28-32
综述  32-43
参考文献  43-47
攻读学位期间的研究成果  47-48
中英文对照  48-49
致谢  49-51

脐血间质干细胞做载体转基因TNF-α诱导裸鼠胃癌细胞凋亡的实验研究

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