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食品中苏丹红Ⅰ的免疫学快速检测方法研究

作　者: 付云洁
导　师: 刘志国
学　校: 武汉工业学院
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 苏丹红I 多克隆抗体 ELISA 胶体金免疫层析试纸条
分类号: R155.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本研究通过制备苏丹红I 多克隆抗体，建立了两种用于快速测定食品中苏丹红I的免疫学检测方法—竞争酶联免疫吸附法（ELIS A）和胶体金免疫层析试纸条法。本文利用重氮法合成苏丹红I衍生物，再用混合酸酐法将苏丹红I衍生物和明胶偶联，形成的苏丹红I衍生物-明胶复合物作为免疫抗原。按照常规免疫程序免疫新西兰白兔制备抗苏丹红I多克隆抗体。免疫程序结束后采用颈动脉取血法获得抗血清，抗血清经辛酸硫酸铵法和亲和层析法纯化后，可以得到特异性的抗苏丹红I抗体。通过优化ELIS A操作中的各种条件，来测定特异性抗体的效价和亲和力，并建立食品中苏丹红I竞争ELISA的检测方法。利用酶标记的苏丹红I抗原和待测样品中可能存在的苏丹红I竞争性的与固相载体上的苏丹红I抗体结合，待测样品中苏丹红I含量多，则形成的非酶标记复合物多，酶标苏丹红I抗原与抗体则结合少，即显色程度与待测样品中的苏丹红I含量成反比。通过绘制线性回归标准曲线，计算样品中苏丹红I的浓度。结果表明苏丹红I抗体的效价为1: 32 000。抑制率曲线得到竞争ELIS A最低检测限为1.0μg /L，IC 50为15.0μg/L，表明抗体具有较高的亲和力。加标回收率为85.8 8 %-97. 83 %，变异系数为4.9%-7 .4 %。该方法对苏丹红II、III、IV的交叉反应率分别为2.7%、6.5%和4.1%。胶体金免疫层析试纸条的制备，是以硝酸纤维素膜（NC膜）作为载体，将抗苏丹红I抗体和抗BSA抗体包被在NC膜上，分别作为检测线（T）和质控线（C）。用胶体金标记的苏丹红I抗原喷涂在金标垫上，最佳工作条件确定后，组装试纸条。在层析作用下，待测样品中可能存在的苏丹红I与金标苏丹红I竞争结合NC膜上的抗体。待测液中的苏丹红I含量越多，与金标抗原的竞争作用越明显。检测线T的显色程度与待测样品中的苏丹红I含量成反比。通过对NC膜上两种包被抗体的浓度和金标垫上金标抗原含量的优化，确定试纸条的最低检测限和灵敏度。结果表明，本方法对辣椒粉中的苏丹红I最低检测限为10μg/ kg。在苏丹红I浓度为5.0 -20 .0μg /kg范围内可实现定量分析。变异系数≤9.23 %。对其他苏丹红染料有低的交叉反应性。与HPLC方法相比，相关系数R2 =0.9 41，测定结果相一致。本方法高效、简便且耗时短，适用于食品中苏丹红I残留的快速检测及大量苏丹红I待检样品的筛查测定。

食品中苏丹红Ⅰ的免疫学快速检测方法研究

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