学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

人脐带间充质干细胞异种移植不育小鼠睾丸的研究

作　者: 吴小英
导　师: 马廉
学　校: 汕头大学
专　业: 儿科
关键词: 脐带间充质干细胞男性生殖细胞分化男性不育
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 33次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

背景与目的:不孕症的发生率日益升高,约占育龄夫妇的15%,其中由男方原因引起者约占一半。男性不育大部分可以通过辅助生殖技术得到纠正,但由于生殖细胞缺乏所致的不育无法通过辅助生殖技术治疗。干细胞具有多向分化的潜能,可以分化为各种组织的细胞包括生殖细胞;已有研究证实胚胎干细胞、成体干细胞在一定的条件下可以分化为雄性生殖细胞,因此干细胞移植为治疗男性不育提供了新的解决途径。人脐带间充质干细胞(HUMSCs)也是一种成体干细胞,理论上也可以向男性生殖细胞分化。本课题主要研究HUMSCs体外在人绝经期促性腺激素及维甲酸诱导培养下向男性生殖细胞方向分化的情况;并将HUMSCs移植到不育小鼠睾丸曲细输精管内,观察其在不育小鼠体内存活及向男性生殖细胞方向分化的能力。方法:采取组织块贴壁培养方法获得HUMSCs,体外采取人绝经期促性腺激素及维甲酸进行诱导培养,诱导后在显微镜下观察细胞形态变化,诱导培养8-14天后行细胞免疫化学、PT-PCR检测诱导后的细胞生殖细胞标记物的表达情况。体内研究方面,脂质体介导增强绿色荧光蛋白质粒pIRES2-EGFP转染HUMSCs,转染后经显微注射方法移植到不育小鼠睾丸曲细输精管,细胞移植40-120天后行免疫组化、免疫荧光观察移植后的HUMSCs在受体小鼠睾丸内存活及向男性生殖细胞方向分化的情况。结果:HUMSCs在人绝经期促性腺激素及维甲酸进行诱导培养8-14天后,在光镜显微镜下观察可见部分细胞形态发生改变,部分长条型的细胞逐渐变圆,细胞器增多,行细胞免疫化学染色显示HUMSCs诱导后能表达生殖细胞的部分标记VASA,Oct4,而未诱导的细胞成阴性表达;RT-PCR显示诱导后的细胞表达α6基因,未诱导的细胞未见α6基因的表达。HUMSCs移植到不育小鼠睾丸曲细输精管40-120天后行免疫组化、免疫荧光观察。免疫组化观察可见细胞移植40-70天能表达生殖细胞的标记:VASA、α6、C-kit和Oct4成阳性表达,而未移植细胞的睾丸组织未见VASA、α6、C-kit和Oct4.表达。免疫荧光显示细胞移植40-60天在受体睾丸内可以观察到绿色荧光信号,少部分表达绿色荧光的细胞同时表达生殖细胞特异性标记VASA、α6、C-kit和Oct4。对照组未移植细胞的小鼠睾丸组织未见阳性表达。结论:HUMSCs在人绝经期促性腺激素及维甲酸进行诱导培养下能表达生殖细胞的部分特征;移植到不育小鼠睾丸曲细输精管后能在异种小鼠睾丸中存活,并表达生殖细胞部分特征。体内外定向诱导HUMSCs可能可以向男性生殖细胞方向分化,HUMSCs将可能为细胞移植治疗男性不育提供一种新的细胞来源,提供一条新的治疗途径。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
主要缩略词中英文对照表  8-9
前言  9-13
技术路线  13-14
第1章：实验  14-35
  1 材料和方法  14-23
  2 结果  23-26
  3 讨论  26-28
  参考文献  28-31
  实验附图  31-35
第2章：发表文章  35-51
  1 综述  35-42
    参考文献  39-42
  2 论著  42-51
    参考文献  49-51
小结  51-52
致谢  52-53
个人简介  53

人脐带间充质干细胞异种移植不育小鼠睾丸的研究

内容摘要

全文目录

相似论文