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三种冷冻保护剂对奶牛冷冻精液品质的影响

作　者: 王立强
导　师: 李青旺；胡建宏
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 养殖
关键词: 奶牛冷冻精液稀释液低密度脂蛋白(LDL) 活率顶体完整率质膜完整性
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

本研究采用假阴道法采集成年种公牛精液,经精液品质检查后,将合格精液用不同冷冻稀释液进行稀释、平衡,制作细管冷冻精液,以筛选出适宜的奶牛精液冷冻稀释液和冷冻保护剂。结果表明:1.在牛精液冷冻时,Ⅱ号冷冻稀释液优于其它3种冷冻稀释液(P<0.05);甘油为最佳的冷冻保护剂,优于乙二醇和DMSO冷冻效果(P<0.05),其最佳浓度为7%,精子冻后活率平均可达0.52±0.057,畸形率≤15.44%,顶体完整率达57.82%。奶牛细管冻精的解冻效果以75℃水浴,2s到6s的解冻时间最佳。2.LDL代替卵黄后不仅改善了精子质量评定时的视野环境,而且冻后精子活率、顶体完整率和质膜完整性相对于对照组均有所提高,8%LDL获得最好的冷冻效果,明显优于对照和其他处理组(P<0.05)。冻后精子活率可达53.42%,精子顶体完整率和质膜完整性分别达到70.32%和50.43%,而对照组仅为42.53%和40.24%。精子直线速度平均为32μm/s,平均路径速度为35μm/s,差异显著(P<0.05);a,b级精子可占精子总数的50%以上,比对照组高出10%。稀释液中低密度脂蛋白(LDL)的最适添加量为8%(w/v)。3.稀释液中添加4.5mg/mL的维生素C时,精子活率为45.61%,质膜完整性为44.21%,顶体完整率为64.76%,精液品质显著高于对照组的36.88%、36.30%、53.40%,差异极显著(P<0.05)。添加0.50%维生素B12效果最好,其精子活力为53.34%,顶体完整率为67.10%、质膜完整性51.35%,明显高于其他组(P<0.05)。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
文献综述  8-14
  第一章家畜精液冷冻技术研究进展  8-10
    1.1 精液冷冻保存研究进展  8-9
    1.2 精液冷冻保存原理  9-10
  第二章牛精液冷冻技术研究进展  10-14
    2.1 影响牛冷冻精液受胎率的主要技术因素  10-12
      2.1.1 冷冻精液稀释液的研究  10
      2.1.2 冷冻精液保护剂  10-11
      2.1.3 精液的稀释及分装  11
      2.1.4 精液的降温和平衡及冷冻  11
      2.1.5 冷冻精液的贮存  11-12
      2.1.6 冷冻精液的解冻  12
      2.1.7 输精  12
    2.2 牛精液冷冻技术的研究与应用前景  12-14
试验研究  14-42
  第三章双糖对奶牛冷冻精液品质的影响  14-21
    3.1 材料与方法  14-16
      3.1.1 试验仪器  14
      3.1.2 溶液的配制  14-15
      3.1.3 染液的配制  15
      3.1.4 精液的采集  15-16
      3.1.5 精液的冷冻  16
      3.1.6 精子活率、畸形率及顶体完整率测定  16
      3.1.7 统计分析  16
    3.2 结果与分析  16-19
      3.2.1 不同稀释液对精液质量的影响  16-17
      3.2.2 不同冷冻保护剂对冻精质量的影响  17
      3.2.3 不同甘油浓度对冻精质量的影响  17-18
      3.2.4 不同解冻温度和时间对冻精质量的影响  18-19
    3.3 结论与讨论  19-20
      3.3.1 稀释液成分与精液冷冻效果分析  19
      3.3.2 冷冻保护剂与精液冷冻效果分析  19
      3.3.3 冻精不同解冻方法的效果分析  19-20
    3.4 小结  20-21
  第四章低密度脂蛋白（LDL）对奶牛冷冻精液品质的影响  21-31
    4.1 材料与方法  21-23
      4.1.1 仪器设备与试验材料  21-22
      4.1.2 低密度脂蛋白（LDL）的提取  22
      4.1.3 稀释液的配制  22-23
      4.1.4 精液的采集  23
      4.1.5 精液的稀释  23
      4.1.6 细管冷冻精液的制作  23
    4.2 冻后精液品质检测  23-24
      4.2.1 精子活率的检测  23
      4.2.2 精子顶体完整率的检测  23
      4.2.3 精子质膜完整率的检测  23
      4.2.4 冻后精子活力及运动参数的评定  23-24
      4.2.5 数据处理  24
    4.3 结果与分析  24-28
      4.3.1 LDL 对冻后精子活率的影响  24-25
      4.3.2 LDL 对精子顶体完整率的影响  25
      4.3.3 LDL 对精子质膜完整性的影响  25-26
      4.3.4 精子活率、顶体完整率和质膜完整性之间的相关性  26
      4.3.5 不同的稀释液对精子运动特性及级别的影响  26-28
    4.4 讨论  28-30
      4.4.1 关于LDL 在冷冻-解冻过程中对精子的保护作用  28
      4.4.2 关于LDL 对冻后精子品质的影响  28-29
      4.4.3 关于精子活率、顶体完整率和质膜完整性之间的相关性  29
      4.4.4 LDL 对精子运动特性及级别的影响  29-30
    4.5 小结  30-31
  第五章维生素C 和维生素B_(12)对牛冷冻精液品质的影响  31-42
    5.1 材料与方法  31-33
      5.1.1 主要仪器  31
      5.1.2 主要药品和试剂  31-32
      5.1.3 精液的采集  32
      5.1.4 精液的稀释  32
      5.1.5 稀释方法  32-33
      5.1.6 分装细管  33
      5.1.7 精液的平衡、冷冻  33
    5.2 冻精品质评定  33-34
      5.2.1 冻精活率及运动性能的测定  33
      5.2.2 质膜完整性的测定  33-34
    5.3 数据分析  34
    5.4 结果与分析  34-37
      5.4.1 维生素C 和维生素B_(12) 对精子运动特性的影响  34-35
      5.4.2 维生素 C 和维生素 B_(12)对精子等级的影响  35-36
      5.4.3 维生素C 和维生素B_(12) 对精子顶体完整率及质膜完整性的影响  36-37
    5.5 讨论  37-39
      5.5.1 维生素C 对精子的保护机理  37-38
      5.5.2 关于维生素B_(12) 在冷冻精液稀释液中保护作用机理  38
      5.5.3 维生素C 对冷冻精液品质的影响  38-39
      5.5.4 维生素B_(12) 对冷冻精液品质的影响  39
    5.6 小结  39-42
参考文献  42-49
致谢  49-50
个人简介  50

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