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两株苦楝内生真菌混合发酵的初步研究

作　者: 赵光跃
导　师: 高锦明；张鞍灵
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 应用化学
关键词: 苦楝内生真菌混合发酵工艺优化化学成分
分类号: TQ920.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

近年来,植物内生真菌由于能够产生与宿主相同或相似的活性成分,已成为微生物领域的研究热点。随着各种各样的癌症和对药物具有抗性的病原菌的出现,人类的健康受到严重的威胁,人们更加渴望获得更多新型、疗效更为显著的天然药物。由于自然资源有限,人们把目光转向了寄生于植物体内的内生真菌。植物内生真菌已成为寻找具有新颖化学结构及生物活性的新资源。苦楝是楝科楝属落叶乔木,在我国分布最广,具有“天然杀虫剂”之美誉。楝科植物中含有多种杀虫活性物质,与自然环境有很好的相容性,是作为无公害生物型杀虫剂的理想植物资源。因此苦楝内生真菌的研究对生物农药的开发有着极其重要的意义。本论文是以两株苦楝内生真菌LN-14和LN-15为对象,研究其混合发酵的次生产物代谢产物的结构和生物活性。旨在探索从微生物中获得新颖天然产物的技术与手段,寻求具有抗老年痴呆的活性物质,为进一步开发苦楝和其内生真菌资源提供理论依据。本论文通过优化工艺,得出LN-14和LN-15的混合发酵条件:接种比例和接种量:LN-14 2%:LN-15 2%;接种顺序:先接LN-15,24h后接入LN-14,接种时间10-14h;液体培养基水平:马铃薯200g/L和葡萄糖20g/L;28℃,120r/min,发酵周期:4d。混合发酵60L。得发酵液乙酸乙酯浸膏(12.6g)和菌丝体乙酸乙酯浸膏(48g)。利用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20、RP-18柱层析等方法对其进行分离纯化,得到了6个化合物。经理化性质和波谱(EI-MS、1H-NMR、13C-NMR)鉴定,以及与标准化合物对照,确定其中两个化合物:醋酸孕双烯醇酮和3,4,8-trimethyl-2,3,3a,4,5,5a,6,9-octahydro-1H-cyclopenta[c]inden-9-ol。其中后者首次从天然产物中分离得到。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-10
第一章文献综述  10-42
  1.1 苦楝植物研究进展  10-20
    1.1.1 苦楝的分类及分布  10
    1.1.2 苦楝的生物活性及其化学成分  10-16
    1.1.3 川楝素的作用机理  16-19
    1.1.4 苦楝资源开发利用  19-20
  1.2 内生真菌的研究概况  20-37
    1.2.1 内生真菌的起源及其生物多样性  20-21
    1.2.2 药用植物内生真菌次生代谢产物的多样性  21-34
    1.2.3 苦楝内生真菌研究现状  34-37
  1.3 混合发酵的研究进展  37-41
    1.3.1 混合发酵的悠久历史  37-38
    1.3.2 混合发酵的应用  38-41
  1.4 立题的意义及依据  41-42
第二章材料和方法  42-49
  2.1 试验材料  42-43
    2.1.1 供试菌种  42
    2.1.2 培养基和培养条件  42
    2.1.3 供试病原菌  42
    2.1.4 试剂  42
    2.1.5 仪器  42-43
  2.2 方法  43-49
    2.2.1 筛选培养基, 活化内生真菌  43
    2.2.2 对峙法测LN-14 和LN-15 的共生性  43
    2.2.3 筛选接种方法  43-44
    2.2.4 种子液制备和确定接种时间  44
    2.2.5 筛选单菌接种量  44
    2.2.6 确定接种顺序  44
    2.2.7 确定发酵周期  44-45
    2.2.8 粗筛液体培养基的营养水平  45
    2.2.9 筛选营养水平和接种比例  45
    2.2.10 抑菌活性的测定  45
    2.2.11 混合发酵及活性成分的提取  45
    2.2.12 发酵产物的分离纯化  45-48
    2.2.13 化合物均质性检测  48
    2.2.14 单体化合物结构鉴定  48-49
第三章结果与分析  49-57
  3.1 优化发酵条件  49-52
    3.1.1 LN-14 与LN-15 的关系  49
    3.1.2 接种方法  49-50
    3.1.3 种子液和接种时间  50
    3.1.4 单菌接种量  50-51
    3.1.5 接种顺序  51
    3.1.6 发酵周期  51-52
    3.1.7 粗筛液体培养基的营养比例  52
    3.1.8 营养水平和接种比例  52
  3.2 抑菌活性的测定  52-54
  3.3 单体化合物均质性检测  54
  3.4 化合物结构解析  54-57
    3.4.1 化合物W-4 的结构鉴定  54-55
    3.4.2 化合物W-6 的结构鉴定  55-56
    3.4.3 其他化合物的结构鉴定  56-57
第四章分析与讨论  57-59
  4.1 内生真菌的鉴定  57
  4.2 菌种的培养  57
  4.3 发酵条件的优化  57-58
  4.4 抑菌活性的测定  58
  4.5 化合物的分离纯化  58-59
第五章结论  59-60
参考文献  60-67
附录  67-68
致谢  68-69
作者简介  69

两株苦楝内生真菌混合发酵的初步研究

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