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A组轮状病毒NSP6蛋白表达及免疫学性质研究

作　者: 李传印
导　师: 陈元鼎；文喻玲
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: A组人轮状病毒 NSP6 基因克隆和重组表达免疫原性亚细胞分布
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

轮状病毒(rotavirus,RV)属呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),是引起人类、哺乳动物类和鸟类腹泻的主要病原体。RV基因组由11个的双链RNA片段组成,分别编码6个结构蛋白(VP1,VP2,VP3,VP4,VP5,VP6)和6个非结构蛋白(NSP1,NSP2,NSP3,NSP4,NSP5/NSP6)。RV病毒颗粒是由三层衣壳组成的二十面体结构,内层(核心)颗粒由VP2以及RNA依赖的RNA聚合酶(VP1)和mRNA帽子结构催化酶(VP3)。双层颗粒由VP6蛋白形成的中间层包裹核心颗粒形成的,双层颗粒可以直接合成病毒mRNA。最外层衣壳由VP4和VP7组成。NSP5与NSP6由同一基因片段编码,NSP6蛋白由包含在NSP5读码框内的另一个读码框编码,大多数病毒中NSP6由92个氨基酸组成。我们对RV NSP6蛋白了解很少。为了研究NSP6的特性,本研究以A组人轮状病毒TB-Chen株病毒NSP5全基因为模板,经PCR,基因重组,将NSP6的编码基因插入到pET载体DNA中构建了表达质粒pET-NSP6,并在大肠杆菌中进行了重组表达。研究结构表明,重组表达的NSP6(rNSP6)量占菌体中总蛋白的34.2%。对rNSP6进行了蛋白纯化,动物免疫研究和在原核大肠杆菌中表达的rNSP6、在Wa或SA11感染的真核MA104细胞中NSP6的合成及亚细胞分布和免疫学性质的研究。结果表明,NSP6可在大肠杆菌细胞中高效表达;rNSP6可诱导豚鼠产生高效价的特异性血清抗体,抗rNSP6豚鼠血清抗体可特异性识别重组表达的rNSP6自身蛋白,可特异性识别菌体细胞中表达的rNSP6和SA11及Wa病毒感染的MA104细胞中合成的NSP6蛋白。进一步研究表明,SA11株和Wa株感染的MA104细胞中合成的NSP6在病毒感染细胞后3h就可以检测到,在12h表达量达到最高,在细胞中呈弥散状分布于细胞质中,并主要积聚在细胞核的周围,没有观察到毒质体样(Viroplasm-like)的结构。本研究结果对深入认识RV NSP6的结构与功能以及生物学免疫学性质奠定了良好的基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
前言  6-11
实验材料及方法  11-22
  一、实验材料  11-13
  二、试验方法  13-22
实验结果与分析  22-31
讨论  31-34
小结  34-35
参考文献  35-39
论文综述  39-46
附录  46-62
  一、缩略词  46-48
  二、主要溶液配方  48-52
  三、实验方法  52-61
  四、TB-CHEN株NSP5基因的核苷酸序列  61
  五、TB-CHEN株NSP6基因序列  61
  六、TB-CHEN株NSP6蛋白氨基酸序列  61-62
致谢  62-63
研究生简历  63-64

A组轮状病毒NSP6蛋白表达及免疫学性质研究

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