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肾癌细胞系786-O中Rho~（high）类干细胞侧群的生物学特征研究

作　者: 崔勇
导　师: 岳中瑾
学　校: 兰州大学
专　业: 外科学
关键词: 罗丹明123 肾癌干细胞 786-0 流式细胞仪分化
分类号: R737.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:最新研究表明,肿瘤干细胞可能是肿瘤恶性增殖的源泉、是化学药物治疗和放射治疗后肿瘤复发的主要原因,因此各类恶性肿瘤中肿瘤干细胞的识别和生物特性研究是当前研究热点,有望发现有助于根治肿瘤治疗的分子靶标。虽然已经从急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、脑肿瘤、非小细胞肺癌、黑色素瘤、前列腺癌和膀胱癌等多种类型的肿瘤组织中成功分离和鉴定出肿瘤干细胞,但肾癌干细胞还没有被鉴定出来。本课题旨在从人肾癌细胞系786—0中分选、鉴别肾癌干细胞,并研究其生物学特性。方法:采用罗丹明（Rh123）染色流式细胞仪分选法从体外培养的细胞中分选出Rho^high和Rho^low两类细胞作为实验模型,然后用软琼脂克隆形成法和免疫缺陷鼠体外成瘤实验比对两种细胞的致瘤能力;x-射线处理后用克隆形成法测定两种细胞的抗辐射特性;并对两者的体外增殖能力、长期分化能力、自我更新能力等进行对比研究;用免疫荧光染色对类肾癌干细胞的分子标记进行摸索。结果:1.肾癌细胞786-0经Rh123染色后,染色深浅不一,呈高低两个明显的亚群,Rho^high细胞所占比例为25.17±3.88%,用流式细胞仪分选后,获得Rho^low纯度为92.43%,Rho^high细胞纯度为67.40%。2.将两种细胞接种于NOD/SCID免疫缺陷型小鼠,1×10⁷个、1×10⁶个、1×10⁵个Rho^high细胞分别在接种后8天、20天、90天形成了实体瘤,而相同数量的Rho^low细胞却几乎没有形成肿瘤。接种1×10⁷个Rho^high细胞的老鼠在15天内100%长出了肿瘤（12/12）,但接种相同数量Rho^low细胞的老鼠只有一只长出了小小的瘤体（1/12）。软琼脂实验也得到了类似的结果,Rho^high细胞在软琼脂中形成的克隆数远高于相同细胞数的Rho^low细胞。3.经不同剂量6MV x-射线处理后,两种细胞的存活率明显不同,Rho^high细胞的克隆存活率高于Rho^low细胞,与未分选细胞类似。4.与Rho^low细胞相比,Rho^high细胞增殖能力更强,细胞倍增时间为21小时,接近于未分选细胞（18小时）;而Rho^low细胞却需要36小时。Rho^high细胞具有潜在分化能力,随着分选后培养时间的延长,Rho^high细胞的比例逐渐下降而Rho^low细胞比例逐渐增加;Rho^low细胞在分选后继续培养过程中却没有观察到细胞的出现。5.两种细胞在CD3、CD4、CD8、CD24、CD44、CD105、CD117、CD133等细胞表面标志物表达水平方面没有明显差异。结论:肾癌细胞系786-0中Rho^high细胞具有肿瘤干细胞特性,经Rh123染色结合流式分选可以作为筛选肿瘤干细胞的一种方法。但肿瘤干细胞标志物还需要进一步探索。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
前言  9-18
  1 干细胞、肿瘤干细胞与肿瘤的发生  9-11
  2 肿瘤干细胞存在的证据  11-14
  3 肾癌和肿瘤干细胞  14-15
  4 罗丹明123与干细胞的关联性研究  15-18
研究内容  18-29
  材料和方法  18-23
  结果  23-25
  讨论  25-28
  结论  28
  展望  28-29
参考文献  29-35
致谢  35-36
附图  36-42
缩略语表  42

肾癌细胞系786-O中Rho~（high）类干细胞侧群的生物学特征研究

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