学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

应用RNAi技术沉默survivin基因对肾癌786-O细胞影响的实验研究

作　者: 李戈
导　师: 王明
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 肾癌 786-O细胞生存素 RNAi
分类号: R737.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 33次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

背景与目的:肾癌是泌尿系统较常见的恶性肿瘤之一。国内肾癌的发病率居泌尿系统肿瘤的第二位,其最常见的病理类型为肾透明细胞癌,约占肾癌的70%~80%。其早期症状不明显,多数患者就诊时已到中晚期,且对化疗和放疗均不敏感,因此寻找一种对肾癌的治疗切实有效的方法显得尤为重要。RNAi是指由外源双链RNA(dsRNA)进入生物体内细胞后引起的与其同源序列的mRNA特异性降解而导致的基因沉默现象,作为一项迅速发展起来的基因阻断技术,是近年研究的一个热点,有望成为新一代抗肿瘤的重要工具。作为近年来发现的一种肿瘤细胞凋亡抑制因子,Survivin在肿瘤发生发展中的作用已受到越来越多的关注,有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。本实验在检测证实survivin基因在人肾癌786-O细胞中有明显表达的基础上,设计合成针对survivin基因的siRNA,运用RNA干扰技术特异性地阻断肾癌786-O细胞系中survivin基因的表达,了解在survivin沉默后对786-O细胞的影响。方法:(1)运用MTT(四唑盐比色)法检测786-O细胞的生长状态并绘制生长曲线,运用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)和免疫组织化学分别检测786-O细胞株中survivin mRNA转录及survivin蛋白的表达情况。(2)利用真核转录载体pcDNA?6.2-GW/EmGFPmiR构建针对survivin基因的干扰载体,用脂质体法转染肾癌786-O细胞后,通过RT-PCR检测survivin基因的mRNA转录水平的变化,免疫组化检测survivin基因蛋白表达水平的变化,MTT法检测细胞活性的改变。结果:(1)检测出肾癌786-O细胞株中有survivin mRNA的表达,细胞中survivin蛋白的表达亦呈阳性。(2)干扰载体转染进入786-O细胞后,通过RNA干扰作用有效地下调了786-O细胞中survivin基因在mRNA与蛋白水平上的表达,细胞活性亦受到抑制。结论:survivin mRNA及survivin蛋白在肾癌786-O细胞中均有明显的表达,通过RNAi技术沉默survivin基因可以下调肾癌786-O细胞survivin基因的表达,同时使细胞生长活性受到抑制,提示肾透明细胞癌的发生发展可能与survivin基因有关,为以survivin基因为靶点的肾癌基因治疗研究提供了实验依据。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-15
第一部分 Survivin 在肾透明细胞癌786-O 细胞株中表达的实验研究  15-29
  1 材料与方法  15-25
  2 结果  25-27
  3 讨论  27-29
第二部分应用RNA 干扰沉默survivin 基因后对肾癌786-O 细胞影响的研究  29-39
  1 材料与方法  29-33
  2 结果  33-36
  3 讨论  36-39
全文结论  39-40
参考文献  40-42
图片  42-49
文献综述 Survivin—肾脏肿瘤RNAi 治疗的新靶点  49-57
致谢  57-58
攻读硕士期间发表论文情况  58

应用RNAi技术沉默survivin基因对肾癌786-O细胞影响的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文