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五味子提取物逆转阿霉素耐药细胞株K562/DOX耐药性的研究

作　者: 邱海洋
导　师: 宋京郁
学　校: 延边大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 多药耐药 多药耐药基因 五味子提取物 K562/DOX细胞 Bcl-2 NF-kB(P65)
分类号: R73-3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:探讨五味子提取物对阿霉素耐药细胞株K562/DOX的耐药逆转作用方法:本研究以人红白血病阿霉素耐药细胞株K562/DOX为研究对象,通过MTT法检测阿霉素单独作用,阿霉素与五味子提取物联合作用下细胞存活率;RT-PCR检测MDR1、MRP1 mRNA表达;Western blotting检测耐药相关蛋白(MDR1)、凋亡相关蛋白(Bcl-2)、以及核转录因子(NF-κB)的表达。结果:①单独应用阿霉素作用于K562/DOX细胞时,细胞存活率无明显变化。当阿霉素和五味子提取物联合作用于K562/DOX细胞时,与对照组或阿霉素组比较,细胞存活率明显下降(P＜0.01);②倒置显微镜下,K562/DOX细胞在没有施加药物作用时,细胞生长状态良好,表面光滑,细胞透明,折光性好,细胞增殖旺盛,可见多数分裂相细胞。阿霉素单独作用K562/DOX细胞是虽然出现了边缘不整,折光性差,但对生长几乎无影响。而五味子提取物与阿霉素联合作用K562/DOX细胞时,细胞胞质回缩,折光性差,边缘不整,胞浆中出现颗粒状物质,细胞数目明显减少,并呈浓度依赖性;③RT-PCR结果表明:阿霉素单独作用K562/DOX细胞时,与对照组相比MDR1、MRP mRNA表达未见明显差异;阿霉素和不同浓度五味子提取物共同作用时,与对照组和阿霉素单独作用时相比MDR1、MRP mRNA表达明显下降(P＜0.01);④Western blotting结果显示:阿霉素单独作用K562/DOX细胞时,与对照组相比Bcl-2、NF-κB(P65)、MDR1蛋白表达未见明显差异;阿霉素和不同浓度五味子提取物共同作用时,与对照组和阿霉素单独作用时相比Bcl-2、NF-κB(P65)、MDR1蛋白水平明显下降(P＜0.01)。结论:1.五味子提取物是有效且低毒的理想肿瘤细胞多药耐药逆转剂。2.五味子提取物对K562/DOX细胞MDR的逆转具有浓度依赖性,即在一定浓度范围内,随浓度增加而逆转性增加。3.五味子提取物可能通过下调MDR、MRP的表达,增强化疗敏感性,恢复或部分恢复DOX在耐药细胞中的积聚。4.五味子提取物能够减少抗凋亡基因Bcl-2及NF-κB P65的表达及通过诱导K562/DOX细胞凋亡而抑制细胞的增殖。五味子提取物通过影响NF-κB调节耐药蛋白MDR1之外,还可能调节Bcl-2的表达,在肿瘤细胞抗凋亡过程中起重要作用。

全文目录


英文缩略词表  7-9
中文摘要  9-11
英文摘要  11-13
引言  13-15
材料与方法  15-24
  2.1 主要材料  15-19
    2.1.1 细胞株  15
    2.1.2 主要仪器与设备  15
    2.1.3 主要试剂与药品  15-16
    2.1.4 实验所用液体的配制  16-19
  2.2 方法  19-23
    2.2.1 人红白血病阿霉素耐药K562/DOX细胞培养  19-20
    2.2.2 MTT法检测细胞生存率  20
    2.2.3 细胞总RNA提取  20
    2.2.4 RT-PCR  20-21
    2.2.5 细胞蛋白提取  21-22
    2.2.6 Western Blotting实验  22-23
  2.3 统计学处理  23-24
结果  24-26
  3.1 阿霉素和五味子提取物对K562/DOX细胞生存率的影响  24
  3.2 阿霉素和五味子提取物对K562/DOX细胞形态学的影响  24-25
  3.3 阿霉素和不同浓度五味子提取物作用K562/DOX细胞MDR1、MRP mRNA的表达  25
  3.4 阿霉素和不同浓度五味子提取物作用K562/DOX细胞MDR1的蛋白表达  25
  3.5 阿霉素5ug/ml单独作用:阿霉素5ug/ml和不同浓度五味子提取物作用时K562/DOX细胞Bcl-2、NF-kappaB(P65)蛋白的表达  25-26
附图  26-32
讨论  32-36
结论  36-37
致谢  37-38
参考文献  38-41
附:综述  41-52
  参考文献  48-52

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究
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