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AFLP分子标记在玉米DUS测试中的应用

作　者: 李保军
导　师: 刘虎岐
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 玉米 DUS测试 AFLP
分类号: S513
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 22次
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内容摘要


DUS测试是对植物新品种的特异性、一致性、稳定性测试的一种传统方法,是授权植物新品种种权的法定测试。传统DUS测试是一项复杂的技术检测,是将申请品种权的新品种与近似品种、标准品种一起栽培,并在试验中观察和测量其特征特性的基础上,描述申请品种、并通过数据分析处理,得出评价结论的过程。检测周期长、费时、费力。本文在对用于玉米DUS测试的51种标准品种代表的标准性状进行形态学测试的同时,应用AFLP分子标记技术对这些标准品种进行AFLP分析,旨在建立标准性状和AFLP分析结果之间的相关性,为玉米新品种鉴定提供更好的检测方法。研究结果如下:1.标准品种形态学测试按照国家标准,对用于玉米DUS测试的51个品种所代表的标准性状进行田间测试,发现测试得到的性状结果与国家标准中标准性状的显示结果一致,用这些品种构建了标准性状的AFLP图谱库。2.AFLP分析体系的优化采用改良的CTAB法提取玉米基因组DNA,在1.0%的琼脂糖凝胶电泳上检测,无污染,DNA无降解;应用EcoRⅠ和MseⅠ两种内切酶和T4连接酶进行酶切连接:进行引物筛选;得到结果清晰可靠,重复性高,稳定好的AFLP电泳图谱。3.扩增结果在64对引物中筛选出2对引物组合,对51个测试样品的DNA进行扩增,共得到81条扩增条带,分子量为100-2000bp,其中多态性条带55条,占多态性比例的62.96%。4.测试性状与AFLP结果利用测得品种的性状与AFLP分析结果进行比较,应用一对引物E4M5可以区分指示各个性状对应的标准品种,记录各性状特异性位点,建立玉米DUS测试的AFLP数据库,应用于新品种的测试。5.遗传多样性利用NTSYS2.10进行相似系数的计算,遗传相似性系数在0.3137-0.8823之间。样品农大108和样品齐319、样品昌7-2和样品铁7922之间的遗传相似性最大,为0.8823,表明样品农大108和样品齐319、样品昌7-2和样品铁7922的亲缘关系最近;样品多16和样品中451的遗传相似系数最小,为0.3137,说明他们之间的亲缘关系最远。对供测得51个样品进行聚类分析,系统树能够很好的区分各个品种。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
第一章 文献综述  9-21
  1.1 玉米概述  9-10
  1.2 植物DUS测试  10-12
  1.3 分子标记的研究进展及在玉米亲缘关系上的应用  12-20
    1.3.1 分子标记的种类  12-13
    1.3.2 分子标记在植物中的应用  13-14
    1.3.3 AFLP分子标记  14-20
  1.4 研究目的和意义  20-21
第二章 材料与方法  21-31
  2.1 植物材料来源  21
  2.2 试剂及仪器设备  21-23
    2.2.1 引物和接头  21-22
    2.2.2 所用试剂  22-23
    2.2.3 所用仪器  23
  2.3 试验方法  23-30
    2.3.1 玉米标准品种的标准性状检验  23-24
    2.3.2 玉米总DNA的提取检测  24-25
    2.3.3 酶切反应体系的建立  25-26
    2.3.4 酶切反应产物的连接  26-27
    2.3.5 预扩增  27
    2.3.6 选择性扩增  27-28
    2.3.7 聚丙烯凝胶电泳  28-30
  2.4 数据分析  30-31
    2.4.1 遗传相似性系数  30
    2.4.2 多态性比例P%  30-31
第三章 结果与分析  31-42
  3.1 玉米标准品种表形性状测试  31-34
  3.2 DNA提取条件优化  34-36
  3.3 DNA酶切体系优化  36-38
    3.3.1 酶切优化实验  36-37
    3.3.2 DNA连接  37-38
  3.4 AFLP扩增反应条件的优化  38-39
  3.5 引物筛选和PCR扩增  39-42
    3.5.1 引物筛选  39
    3.5.2 DUS测试标准性状与AFLP结果比较  39-40
    3.5.3 玉米标准品种的遗传多样性  40-41
    3.5.4 聚类分析  41-42
第四章 讨论  42-48
  4.1 标准品种的性状测试结果比较  42
  4.2 玉米AFLP体系优化过程  42-43
  4.3 标准品种被测性状与AFLP结果分析  43-47
  4.4 样品遗传多样性  47
  4.5 样品亲缘关系  47-48
第五章 结论  48-49
第六章 展望  49-50
参考文献  50-55
致谢  55-56
作者简介  56

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 禾谷类作物 > 玉米（玉蜀黍）
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