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结核分枝杆菌DNA修复fpg基因克隆表达及性质研究

作　者: 胡锦
导　师: 谢建平
学　校: 西南大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: DNA损伤碱基切除修复甲酰嘧啶-DNA-糖基化酶结核分枝杆菌
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 28次
引　用: 1次
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内容摘要

目前结核病仍然是全球人类健康的主要威胁,原发性耐药在耐药结核病产生中占主导地位。全球约有17-20亿的人感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,即结核菌或M.tuberculosis),病人约有2000万,每年感染M.tuberculosis的患者有约3000万,在800万的新患者中,约200万死于该病。近几年间,我们不断加大结核病,疟疾以及艾滋病这三大疾病的处理力度,在世界卫生组织公布的22个限制结核控制成效的高负担国中,中国和印度已成为结核病最多的两个国家。M. tuberculosis的潜伏感染直接导致了结核病治疗疗程长,疗效差,以及化疗后易复发等,因为疗程长,不能负担所需的医疗费用,病人不能充分化疗,这也是结核病高复发率及耐药病例增多的原因,同时也是结核病难治愈的原因。维持基因组稳定是生物生存的基础。碱基切除修复(Base Excision Repair, BER)是DNA修复的主要方式之一。碱基切除修复对结核分枝杆菌等胞内致病菌尤其重要。fpg是碱基切除修复的关键酶。通过比较分枝杆菌的基因组,发现结核菌较其他非致病分枝杆菌普遍具有碱基切除修复基因。这提示碱基切除修复可能与结核菌在宿主体内存活和致病有关。这条途径也许是新结核病药物研发的重要靶标。本研究针对此现状,在大肠杆菌中克隆表达结核分枝杆菌H37Rv -fpg,再经IPTG诱导,Ni2+ Sepharose纯化重组蛋白,针对该蛋白开展进一步的研究,以期得到相关的信息。论文还比较了重组菌和空载转化菌株对双氧水和UV辐射的抗性,探讨了结核菌fpg基因在其中的功能。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
第一章综述  7-19
  1.1 基因组的适度稳定性是生物生存的基础  7
  1.2 加修复基因概述  7-9
  1.3 FPG超家族、三维结构  9-10
  1.4 FPG作用机理  10-11
  1.5 分枝杆菌FPG的基因组学研究  11-19
第二章绪论  19-20
第三章实验材料和方法  20-28
  3.1 实验材料  20-22
  3.2 试验方法  22-28
第四章实验结果  28-33
  4.1 fpg基因克隆和扩增  28-29
  4.2 重组FPG的表达与纯化  29-30
  4.3 重组蛋白表达条件优化  30
  4.4 重组质粒及IPTG对宿主菌的影响  30-31
  4.5 M.tuberculosis重组FPG蛋白生物抗氧化压力实验  31-32
  4.6 M.tuberculosis重组FPG蛋白生物抗紫外诱变实验  32-33
第五章讨论与分析  33-35
  5.1 fpg基因克隆和扩增  33
  5.2 M.tuberculosis H_(37)Rv株FPG的表达与纯化  33-34
  5.3 FPG重组菌的活性检验  34-35
第六章结论与展望  35-36
参考文献  36-39
致谢  39-40
在学期间所发表的文章  40

结核分枝杆菌DNA修复fpg基因克隆表达及性质研究

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