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三氯乙烯致敏豚鼠肝组织中细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8水平研究

作　者: 冯晓亮
导　师: 朱启星；杨永坚；沈彤
学　校: 安徽医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 三氯乙烯 肝损伤 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-1 白细胞介素-6 白细胞介素-8
分类号: R758.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的检测并比较不同组豚鼠肝组织中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8表达水平,研究细胞因子在TCE致敏豚鼠肝损伤中的作用,探讨三氯乙烯药疹样皮炎合并的肝损伤机制。方法选用体重范围为250 g左右白色雌性豚鼠45只,随机分成空白对照组(5只)、溶剂对照组(5只)、TCE处理组(35只),依照豚鼠最大值实验(guinea pig maximization test,GPMT)方法建立动物致敏模型,并在终末激发后依据致敏结果以及取材时点不同(分别于终末激发后24h、72h取材),将TCE处理组分为TCE致敏24h组、72h组和TCE未致敏24h组、72h组。观察和记录受试区的皮肤反应情况并进行拍照,按表一对皮肤反应进行评分。抽取豚鼠血液并处死豚鼠,在无菌条件下迅速取下豚鼠肝脏,部分做成蜡块,部分做组织匀浆。于自动生化分析仪上检测肝功能,HE染色观察病理学改变,免疫组织化学方法以及酶联免疫吸附试验检测豚鼠皮肤肝组织中TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8的表达水平,用SPSS 13.0统计软件包对实验结果进行统计分析。结果1.在此次皮肤致敏反应试验中,空白组和溶剂对照组均未见红斑或水肿;TCE处理组的30只豚鼠中有19只出现红斑,致敏率为63.3%。2.肝功能TCE致敏组的ALT、AST水平较溶剂对照组升高,有统计学意义(p<0.05);TCE致敏72h组ALT、AST水平显著高于TCE致敏24h组以及TCE14d组,且有统计学意义(p<0.05);TCE致敏72h组ALB水平下降,与溶剂对照组比较有统计学意义(p<0.05)。3.病理学观察空白对照组、溶剂对照组豚鼠肝细胞排列整齐,胞质均匀,胞核大而圆,核仁明显,核膜清晰; TCE未致敏组能偶见肝细胞水肿;TCE致敏24h组中能够见到少量肝细胞水肿;TCE致敏72h组中能够见到较多肝细胞水肿,呈空泡样改变,并有胞核破裂消失。4.肝组织中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8水平检测4.1 TNF-α检测结果免疫组化结果:TCE14d组、TCE致敏24h组、TCE致敏72h组TNF-α水平较溶剂对照组上升(p<0.05);TCE致敏组肝组织中TNF-α水平分别高于各自未致敏组(p<0.05);TCE致敏72h组肝组织中TNF-α水平要高于TCE致敏24h组以及TCE14d组(p<0.05)。ELISA结果:TCE未致敏24h组、TCE致敏组24h组、TCE未致敏72h组、TCE致敏72h组肝组织中TNF-α水平高于溶剂对照组(p<0.05);TCE致敏24h组、TCE致敏72h组肝组织中TNF-α水平分别高于各自未致敏组(p<0.05);TCE致敏72h组、TCE致敏24h组肝组织中TNF-α水平均高于TCE14d组水平p<0.05)。4.2 IL-1检测结果免疫组化结果:与溶剂对照组比较,TCE致敏24h组、TCE致敏72h组以及TCE未致敏24h组肝组织中IL-1β水平升高(p<0.05);TCE致敏组24h、TCE致敏72h组肝组织中IL-1β水平分别高于各自未至敏组(p<0.05);TCEh致敏24组、TCE致敏72h组肝组织中IL-1β水平均高于T14d组(p<0.05);而且,TCE致敏72h组肝组织中IL-1β水平要高于TCE致敏24h组(p<0.05)。ELISA结果:TCE处理的各组肝组织中IL-1水平较溶剂对照组都上升,除TCE未致敏72h组外,其它组有统计学意义(p<0.05);TCE致敏72h组肝组织中IL-1水平高于TCE未致敏72h组(p<0.05);TCE致敏72h组肝组织中IL-1水平高于TCE致敏24h组、TCE14d组(p<0.05)。4.3 IL-6检测结果免疫组化结果:TCE致敏24h组、TCE致敏72h组肝组织中IL-6水平较溶剂对照组升高(p<0.05);TCE致敏24h组、TCE致敏72h组肝组织中IL-6水平分别高于各自未至敏组(p<0.05);TCE致敏24h组、TCE致敏72h组肝组织中IL-6水平均高于T14d组(p<0.05)。ELISA结果:TCE致敏组24h组、TCE未致敏72h组、TCE致敏72h组较溶剂对照组升高,差异且有统计学意义(p<0.05);TCE致敏72h组肝组织中IL-6水平高于TCE未致敏72h组,差异有统计学意义(p<0.05);TCE致敏72h组、TCE致敏24h组肝组织中IL-6水平均高于TCE14d组水平,其中TCE致敏72h组有统计学意义(p<0.05)。4.4 IL-8检测结果免疫组化结果:与溶剂对照比较,TCE致敏24h组、TCE致敏72h组肝组织中IL-8水平升高(p<0.05);TCE致敏24h组、TCE致敏72h组肝组织中IL-8水平分别高于各自未致敏组(p<0.05);TCE致敏24h组、TCE致敏72h组肝组织中IL-8水平均高于T14d组(p<0.05)。ELISA结果:TCE处理的各组肝组织中IL-8水平都上升,且有统计学意义(p<0.05);TCE致敏72h组肝组织中IL-8水平高于TCE未致敏72h组,差异有统计学意义(p<0.05);TCE致敏72h组、TCE致敏24h组肝组织中IL-8水平均高于TCE14d组水平,其中TCE致敏72h组有统计学意义(p<0.05)。5.肝组织中细胞因子以及细胞因子与肝功能间相关性分析TNF-α与IL-1、IL-6、IL-8之间存在显著正相关,即随着肝组织中TNF-α水平的上升,肝组织中IL-1、IL-6、IL-8的表达也增加;IL-1与IL-6、IL-8之间也存在显著正相关,但IL-6与IL-8相关性无统计学意义。ALT、AST与TNF-α、IL-6呈正相关,且有统计学意义(p<0.05);除与TNF-α呈负相关有统计学意义(p<0.05),ALB与IL-1、IL-6、IL-8相关性无统计学意义。结论:本研究证实TCE对豚鼠具有致敏作用;能够引起致敏豚鼠不同程度的肝损伤;TCE致敏豚鼠肝组织内TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8水平较其它组高,且ALT、AST与TNF-α、IL-6呈正相关,提示TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8在三氯乙烯致敏豚鼠肝损伤的过程中发挥重要作用。

全文目录


英文缩略词  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
前言  13-15
材料和方法  15-24
结果  24-39
讨论  39-42
结论  42-49
参考文献  49-53
个人简介  53-54
致谢  54-55
综述  55-67

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中图分类: > 医药、卫生 > 皮肤病学与性病学 > 皮肤病学 > 变态反应性及中毒性皮肤病
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