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纳米羟基磷灰石/胶原人工骨材料结合血管内皮生长因子的骨细胞相容性研究

作　者: 赵辉
导　师: 康意军
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 纳米羟基磷灰石/胶原人工骨(NHAC) 血管内皮生长因子(VEGF) 同种异体骨骨水泥成骨细胞骨细胞相容性
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：选用MG-63细胞株培养的成骨细胞与纳米羟基磷灰石／胶原人工骨材料(NHAC)结合血管内皮生长因子(VEGF)共同培养,从细胞学的角度评价复合材料的骨细胞相容性,并与同种异体骨,骨水泥及空白对照组比较,为临床应用提供实验依据。方法：用106代MG-63细胞株体外培养成骨细胞,并在NHAC/VEGF,同种异体骨,骨水泥三种材料表面及空白对照组表面做细胞培养,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定细胞增殖活力；采用考马斯亮蓝法,测定细胞与材料复合培养后总蛋白质含量；采用逆转录酶链反应(RT-PCR)技术对成骨细胞培养后的ALP mRNA和骨钙素(OC)mRNA的转录的表达进行分析。采用钙标比色法在各种材料表面对材料中成骨细胞分泌的无机钙质进行定量分析,分析NHAC/VEGF的骨细胞相容性,并比较同种异体骨,NHAC/VEGF,骨水泥三组之间骨细胞相容性有无差异。结果：1、MTT法测定的细胞增殖活力结果可见各组材料的细胞随着培养时间的延长,数量都有所增加,在各个时间点各组之间细胞的吸光度值都有显著统计学差异(P<0.05)。2、成骨细胞在不同材料上的总蛋白含量,培养早期同种异体骨材料组高于其他组,NHAC/VEGF材料组大于对照组和骨水泥组,骨水泥组和对照组差异不大。各组间相比均有统计学差异(P<0.05)。随着培养时间延长,蛋白质含量都有增加趋势,培养中期各组蛋白质含量增加明显,与成骨细胞成熟后相比,差别不明显。3、成骨细胞分化能力测定：成骨细胞在三种材料上培养7天后ALPmRNA在各组均有表达,ALP mRNA相对表达水平同种异体骨材料组>NHAC/VEGF材料组>骨水泥组,组间比较具有显著性差异(P<0.05)；OC在各组均没有表达。14天后ALP mRNA相对表达水平同种异体骨材料组和NHAC/VEGF材料组无显著统计学差异(P>0.05),但明显高于骨水泥组,组间比较具有统计学差异(P<0.05)；OC mRNA在骨水泥组没有表达,在同种异体骨材料组和NHAC/VEGF材料组仅有少量表达。21天后ALP mRNA在各组均有表达,ALP mRNA相对表达水平骨水泥组>NHAC/VEGF材料组>同种异体骨材料组,组间比较具有显著统计学差异(P<0.05)；OC mRNA在三组中均有表达,其中同种异体骨材料组和NHAC/VEGF材料组表达高于骨水泥组,其相对表达水平两组间没有明显统计学差异(P>0.05),但与骨水泥组相比有明显统计学差异(P<0.05)。4、成骨细胞在不同材料上无机钙的测定：随着培养时间的增加,各组细胞中钙含量有明显增加,白始至终同种异体骨材料组细胞分泌的无机钙水平高于其他组,NHAC/VEGF材料组仅次之,两者相比无明显统计学差异(P>0.05),但都明显优于骨水泥组,组间比较具有统计学差异(P<0.05)。结论：1、NHAC/VEGF材料的骨细胞相容性明显优于骨水泥,与同种异体骨相比,NHAC/VEGF材料的骨细胞相容性稍差。2、NHAC/VEGF材料具有较好的骨细胞相容性,仍不失为一种新型复合人工骨材料,用于修复骨缺损。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-12
英文缩略词表  12-13
第一章前言  13-16
第二章材料和方法  16-24
  一、成骨细胞的培养  16
  二、生物材料的制备  16-17
  三、骨细胞相容性研究  17-24
第三章实验结果  24-31
  3.1 细胞形态学观察  24
  3.2 细胞增殖检测  24-25
  3.3 成骨细胞在不同材料上蛋白含量的测定  25-26
  3.4 成骨细胞分化能力测定  26-29
  3.5 成骨细胞在不同材料上无机钙的测定  29-31
第四章讨论  31-34
  4.1 人工骨材料  31
  4.2 本实验的意义  31-34
第五章结论  34-35
参考文献  35-40
综述  40-52
致谢  52

纳米羟基磷灰石/胶原人工骨材料结合血管内皮生长因子的骨细胞相容性研究

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