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RNAi下调Survivin及VEGF表达抑制胰腺癌细胞增殖、凋亡及血管形成的实验研究

作　者: 宋建林
导　师: 李宜雄
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: Survivin VEGF RNAi Panc-1 HUVEC 胰腺癌
分类号: R735.9
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：探讨小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对人胰腺癌细胞株PANC-1Survivin和／或血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的抑制作用,对胰腺癌细胞生长、凋亡的影响；并制备相应的条件培养基作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),测定抑制人胰腺癌细胞株PANC-1survivin表达后条件培养基对内皮细胞生长、凋亡的影响；方法：分别设计并合成针对Survivin及VEGF的siRNA表达载体,经脂质体转染PANC-1细胞。实时荧光定量PCR和Western-blot半定量检测胰腺癌细胞内Survivin和VEGF的表达情况；采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测转染后PANC-1细胞的增殖,流式细胞仪检测转染后PANC-1细胞的凋亡率；将各组转染后Panc-1细胞培养液收集,作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HUVEC的增殖,流式细胞仪检测HUVEC的凋亡率。结果：1.成功构建4个针对Survivin的载体(S1、S2、S3、S4), Survivin mRNA及蛋白表达明显下降,其中载体S4抑制效率最高；抑制Survivin表达后胰腺癌细胞Panc-1增殖减慢,细胞凋亡率增加；同时HUVEC(人脐静脉内皮细胞)增殖减慢,细胞凋亡率增加。2.成功构建4个针对VEGF的载体(V1、V2、V3、V4), VEGF mRNA及蛋白表达明显下降,其中载体V3抑制效率最高；抑制VEGF表达后胰腺癌细胞Panc-1增殖减慢,细胞凋亡率增加；同时HUVEC(人脐静脉内皮细胞)增殖减慢,细胞凋亡率增加。3.同时抑制Survivin和VEGF表达后,较对照组及单独抑制Survivin或VEGF组,胰腺癌细胞Panc-1增殖显著减慢,细胞凋亡率显著增加；同时HUVEC(人脐静脉内皮细胞)增殖显著减慢,细胞凋亡率显著增加。结论：1.靶向Survivin或VEGF的RNAi能够有效抑制胰腺癌细胞Survivin的表达,抑制胰腺癌细胞的增殖,增加胰腺癌细胞的凋亡,并通过抑制血管内皮细胞的增殖,增加血管内皮细胞的凋亡,抑制肿瘤血管的形成。2.同时靶向Survivin及VEGF的RNAi能够同时有效抑制胰腺癌细胞Survivin及VEGF的表达,较单独抑制Survivin或VEGF,显著抑制胰腺癌细胞的增殖,增加胰腺癌细胞的凋亡,并通过抑制血管内皮细胞的增殖,显著增加血管内皮细胞的凋亡,抑制肿瘤血管的形成。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
主要英文縮略词表  9-10
1 前言  10-12
2 材料和方法  12-28
  2.1 实验材料  12-13
  2.2 实验方法  13-28
3 实验结果  28-37
  3.1 各载体组转染率  28-29
  3.2 RNAi对Panc-1细胞Survivin及VEGF的抑制作用及靶点筛选  29-31
  3.3 RNAi对Panc-1细胞Survivin及VEGF的单独及同时抑制作用  31-32
  3.4 Panc-1细胞及HUVEC的增殖能力检测  32-33
  3.5 Panc-1细胞及HUVEC的细胞凋亡检测  33-37
4 讨论  37-51
5 结论  51-52
参考文献  52-57
综述一  57-81
  参考文献  70-81
综述二  81-94
  参考文献  90-94
攻读学位期间发表的论文  94-95
致谢  95

RNAi下调Survivin及VEGF表达抑制胰腺癌细胞增殖、凋亡及血管形成的实验研究

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