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CXCR7对结直肠癌细胞EMT的影响

作　者: 高超
导　师: 冯向营
学　校: 大连大学
专　业: 肿瘤学
关键词: CXCR7 E-钙黏蛋白 波形蛋白 siRNA
分类号: R735.34
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：探讨趋化因子受体CXCR7、E-钙黏蛋白（E-Cadherin）和波形蛋白（Vimentin）在结直肠癌细胞株中的表达情况，并通过核酸干扰靶向技术沉默CXCR7基因，检测CXCR7对结肠癌细胞E-Cadherin和Vimentin的影响。方法：1.采用正常人结肠细胞株FHC和结肠癌细胞株HCT-116、LOVO、COLO-205、CACO-2进行研究，通过real-time PCR和Western blot技术分别检测细胞中CXCR7、E-Cadherin、Vimentin基因和蛋白的表达情况，并选出侵袭性较强的结肠癌细胞株进行下一步实验。2.通过脂质体（lipofectamineTM2000）作为荧光标记的siRNA载体转染LOVO细胞和COLO-205细胞，并计算倒置荧光显微镜下的转染效率。化学合成CXCR7基因siRNA序列，以最佳转染条件转染细胞后，分别采用real-time PCR以及Western-blot法再次检测E-Cadherin、Vimentin表达情况。结果：1.趋化因子受体CXCR7、E-Cadherin和Vimentin在实验所用细胞株中均有表达；CXCR7和Vimentin在结直肠癌细胞株表达明显高于正常结直肠细胞株（P <0.05）；E-Cadherin在结直肠癌细胞株的表达低于正常结直肠细胞株（P <0.05）。2.转染CXCR7-siRNA的结直肠癌细胞株Vimentin的基因和蛋白表达明显下降（P <0.05），而E-Cadherin的基因和蛋白表达增多（P <0.05）。结论：CXCR7基因在结直肠癌细胞中高表达，沉默CXCR7基因能使E-Cadherin表达增多，Vimentin表达减少。提示CXCR7-siRNA可能影响结直肠癌细胞株中EMT的发生和发展。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-8
引言  8-10
1 材料方法  10-19
  1.1 主要试剂  10-11
  1.2 主要试剂的配制  11-12
  1.3 主要仪器  12
  1.4 细胞培养  12
  1.5 real time PCR 检测 CXCR7、E-Cadhering 和 Vimentin mRNA 的表达  12-14
  1.6 Western bloting 检测 CXCR7、E-Cadhering 和 Vimentin 蛋白质表达情况  14-17
  1.7 抑制 CXCR7 基因表达对 E-cadherin 和 Vimentin 的影响  17-18
    1.7.1 转然 CXCR7-siRNA 后 Western blot 检测 E-cadherin 和 Vimentin 蛋白表达  18
    1.7.2 转然 CXCR7-siRNA 后 real time PCR 检测 E-cadherin 和 Vimentin mRNA 表达  18
  1.8 统计学分析  18-19
2 结果  19-27
  2.1 real time PCR 检测细胞中 CXCR7、E-Cadherin 和 Vimentin 基因表达情况  19-22
  2.2 Western blot 检测细胞中 CXCR7、E-Cadherin、Vimentin 蛋白表达情况  22-23
  2.3 siRNA 抑制 CXCR7 表达对 E-Cadherin 和 Vimentin 影响  23-27
    2.3.1 Western blot 检测细胞中 E-Cadherin、Vimentin 蛋白表达情况  24-25
    2.3.2 real-time PCR 检测细胞中 E-Cadherin、Vimentin 蛋白表达情况  25-27
3 讨论  27-29
结论  29-32
附录 A 缩略词  32-33
附录 B 综述  33-41
  参考文献  38-41
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  41-42
致谢  42

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 大肠肿瘤
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