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EMMPRIN在胃癌SGC-7901细胞中的表达及生物学影响研究
作 者: 亢渝俊
导 师: 姜政
学 校: 重庆医科大学
专 业: 内科学
关键词: EMMPRIN SGC-7901 侵袭 迁移
分类号: R735.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 5次
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内容摘要
目的:构建pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRNA-EMMPRIN重组质粒,通过脂质体Lipofectamine2000将其转染SGC-7901细胞,验证其在SGC-7901细胞中的表达情况,并检测其对SGC-7901细胞体外实验中侵袭以及迁移的变化,从基因的维度提供解决消化道肿瘤问题的基本思路。方法:(1)从结肠癌细胞株SW-480细胞中提取总RNA,通过RT-PCR获得EMMPRIN基因,将其克隆到质粒pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN,将其转染SGC-7901真核表达细胞,通过对其绿色荧光蛋白表达情况的观察、RT-PCR及Western blot检测其在SGC-7901中的表达;(2)体外合成针对人EMMPRIN的干扰质粒pshRNA-EMMPRIN4组,通过测序、RT-PCR和Western blot检测其在SGC-7901中的表达并筛选出沉默效率最高的质粒组;(3)将pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRNA-EMMPRIN分别通过脂质体Lipofectamine2000将其转染SGC-7901细胞,Transewell检测各组SGC-7901细胞侵袭及迁移生物学行为的影响。结果:(1)通过RT-PCR获得EMMPRIN基因片断,成功构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN,验证了其在SGC-7901细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合;(2)成功构建pshRNA-EMMPRIN,并经测序、RT-PCR及western blot筛选出对沉默效果明显的重组质粒;(3)成功观察到pEGFP-N1-EMMPRIN组与pshRNA-EMMPRIN组之间SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力存在明显差异。结论: EMMPRIN能明显增强肿瘤细胞的侵袭与迁移能力,降低EMMPRIN表达量能够明显减弱肿瘤的侵袭和迁移,为消化道肿瘤的基因治疗奠定基础。
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全文目录
符号说明 5-7 摘要 7-9 ABSTRACT 9-11 前言 11-13 第一部分 EMMPRIN 真核表达载体的构建及其在 SGC-7901 细胞中的表达 13-35 1 材料和方法 13-29 2 结果 29-33 3 讨论 33-35 第二部分 EMMPRIN 短发夹 RNA 的构建及筛选 35-48 1 材料和方法 35-42 2 结果 42-46 3 讨论 46-48 第三部分 重组质粒 pEGFP-N1-EMMPRIN 与 pshRNA-EMMPRIN4 对SGC-7901 细胞侵袭和迁移的影响 48-56 1 材料和方法 48-51 2 结果 51-53 3 讨论 53-56 全文总结 56-57 参考文献 57-61 文献综述 61-68 参考文献 65-68 致谢 68-69 攻读硕士学位期间发表的论文 69-70
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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