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NY-ESO-1特异性TCR基因转导人PBMC及转导后细胞功能研究

作　者: 郭佳
导　师: 闾军
学　校: 首都医科大学
专　业: 内科学
关键词: TCR PBMC NY-ESO-1
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的将具有肿瘤抗原NY-ESO-1特异性的T细胞受体转导至人外周血淋巴细胞中，特异性增强转导后细胞体外识别NY-ESO-1及杀伤表达该抗原的肝癌细胞的能力，为进一步研究以NY-ESO-1为靶标的过继性免疫治疗研究奠定前期基础。方法将NY-ESO-1特异性T细胞受体基因通过体外电转的方式转导至新分离的正常人PBMCs中，RT-PCR法鉴定转导是否成功；通过流式细胞仪对转导后的PBMCs进行表型分析；用特异性NY-ESO-1b抗原肽(p157-165)刺激转导阳性的PBMCs，ELISPOT法检测转导后PBMCs细胞分泌IFN-γ的能力，并通过实时细胞监测仪检测转导后细胞对肿瘤细胞的体外杀伤作用。结果1. RT-PCR检测到电转后PBMCs能够扩增出特异性TCR片段；2.流式检测结果显示电转pCDNA3.1-ESO-TCR质粒的PBMCs细胞表面特异性TCR表达率高于未电转质粒的PBMCs的表达率(P<0.05)；3.经多肽刺激后，与未电转质粒的PBMCs相比，电转质粒的PBMCs分泌IFN-γ的斑点数明显增多(P<0.05)。4.经NY-ESO-1特异性TCR转导的PBMCs体外杀伤作用明显提高。结论1.通过体外电转的方式提高PBMC表面特异性TCR表达率，进而提高PBMC体外特异性杀伤NY-ESO-1阳性肿瘤细胞的能力，为肿瘤免疫治疗提供研究基础。2.成功建立慢病毒感染人PBMC的方法，为进一步利用慢病毒转导TCR基因至人PBMC奠定基础。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-7
前言  7-9
第一部分电转 NY-ESO-1 特异性 TCR 质粒至人 PBMC 及细胞功能检测  9-28
  1 实验材料  9
  2 实验方法  9-22
  3 结果  22-26
  4 讨论  26-28
第二部分建立慢病毒感染正常人 PBMC 的方法  28-41
  1 实验材料  28-29
  2 实验方法  29-35
  3 实验结果  35-38
  4 讨论  38-41
结论  41-42
参考文献  42-46
文献综述  46-63
  参考文献  54-63
附录  63-70
攻读学位期间发表文章情况  70-71
致谢  71-72
个人简历  72

NY-ESO-1特异性TCR基因转导人PBMC及转导后细胞功能研究

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