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SPATA5L1对KB细胞增殖及迁移能力的影响

作　者: 任园园
导　师: 许玉杰
学　校: 苏州大学
专　业: 临床医学
关键词: SPATA5L1 Wnt/β-catenin 转染 肿瘤转移与复发
分类号: R73-36
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 2次
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内容摘要


目的：通过研究基因转染的SPATA5L1对KB细胞增殖和迁移能力的影响以及对Wnt/β-catenin信号通路的作用,探索肿瘤放化疗后复发和转移的分子机制。方法：构建一携带全部SPATA5L1cDNA序列的重组质粒(pEX-1-SPATA5L1)并转染到KB细胞,得到稳定表达的转染细胞株。不携带基因的空质粒转染细胞株和非转染KB细胞作为对照细胞。显微镜观察转染细胞株的形态学变化,CCK-8比色法检测了转染细胞株的增殖能力,Transwell迁移实验观察转染细胞株的迁移能力,分别用荧光定量PCR和蛋白印迹技术检测了转染细胞内与Wnt信号通路有关的基因E2F1、β-catenin和c-myc的mRNA表达水平和蛋白含量变化。结果：成功获得稳定高表达SPATA5L1的转染细胞株pEX-1-SPATA5L1-KB细胞。与两种对照细胞相比较,转染细胞的形态明显梭形、纤维细胞样改变,细胞增殖和迁移能力明显增强(p<0.01),β-catenin和c-myc的mRNA表达水平和蛋白含量明显增加(p<0.01),E2F1蛋白含量明显减少而mRNA表达水平没有明显变化。结论：蛋白SPATA5L1可以通过促进KB细胞内E2F1蛋白的降解或转移而激活Wnt/β-catenin信号通路,明显提高KB细胞的增殖和迁移能力,可能是肿瘤放化疗后复发和转移的分子机制之一。

全文目录


中文摘要  4-5
Abstract  5-8
前言  8-12
第一部分 SPATA5L1重组过表达质粒的构建、转染及稳转株筛选  12-23
  一、实验材料与仪器  12-13
    1.1 主要材料  12
    1.2 主要试剂  12-13
    1.3 主要仪器  13
  二、实验过程  13-18
    2.1 细胞准备  13-14
    2.2 细菌准备  14
    2.3 SPATA5L1全基因序列的合成  14-15
    2.4 目的基因SPATA5L1克隆到载体pEX-1中  15-17
    2.5 G418最佳作用浓度  17
    2.6 细胞转染  17
    2.7 稳定转染细胞株中SPATA5L1蛋白表达的鉴定  17-18
  三、结果  18-21
    3.1 鉴定PCR扩增产物大小  18-19
    3.2 重组过表达质粒酶切鉴定  19
    3.3 菌液测序  19-20
    3.4 G418最佳作用浓度  20-21
    3.5 转染效率  21
    3.6 稳定转染细胞株的建立  21
    3.7 KB细胞及稳定转染细胞株中SPATA5L1蛋白表达的鉴定  21
  四、讨论  21-23
第二部分 SPATA5L1基因对KB细胞增殖与迁移的影响  23-30
  一、实验材料与仪器  23-24
    1.1 细胞系  23
    1.2 主要试剂  23
    1.3 主要材料  23
    1.4 主要设备  23-24
  二、实验方法  24-25
    2.1 细胞准备  24
    2.2 SPATA5L1基因对细胞形态的影响  24
    2.3 SPATA5L1基因对细胞增殖的影响  24-25
    2.4 SPATA5L1基因对细胞迁移能力的影响  25
  三、实验结果  25-29
    3.1 SPATA5L1基因对细胞形态的影响  25-26
    3.2 SPATA5L1基因对细胞增殖的影响  26-27
    3.3 SPATA5L1基因对细胞迁移能力的影响  27-29
  四、讨论  29-30
第三部分 SPATA5L1基因对KB细胞E2F1、β-catenin、c-myc基因表达量的影响  30-37
  一、实验材料  30
    1.1 细胞系  30
    1.2 主要试剂  30
    1.3 主要仪器  30
  二、实验方法  30-32
    2.1 细胞准备  30-31
    2.2 Real-time PCR  31-32
  三、实验结果  32-34
    3.1 目的基因的特异性表达验证  32-34
    3.2 目的基因的mRNA表达水平  34
  四、讨论  34-37
第四部分 SPATA5L1基因对KB细胞内E2F1、β-catenin、c-myc蛋白含量的影响  37-42
  一、实验材料  37-38
    1.1 细胞系  37
    1.2 主要试剂  37-38
    1.3 主要仪器设备  38
  二、实验方法  38-39
    2.1 细胞准备  38
    2.2 Western blot检测细胞内蛋白含量  38-39
  三、实验结果  39-41
    3.1 细胞内E2F1、β-catenin、c-myc蛋白含量  39-41
  四、讨论  41-42
结论  42-43
参考文献  43-45
综述  45-75
  参考文献  61-75
致谢  75

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究 > 治疗实验
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