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sFlt-1与VEGF在肾小球血管内皮细胞损伤中作用机制的研究

作　者: 杜慧
导　师: 乔福元
学　校: 华中科技大学
专　业: 妇产科学
关键词: 子痫前期血清肾小球血管内皮细胞通透性 sFlt-1 VEGF 转染
分类号: R714.245
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究可溶性血管内皮生长因子受体1(soluble fims-like tyrosine kinase recepter1, sFlt-1)在正常及子痫前期患者血清中蛋白水平的差异,以及血清中sFlt-1蛋白水平变化对肾小球血管内皮细胞单层通透屏障的影响,探讨子痫前期血清中sFlt-1表达水平的变化与肾小球血管内皮细胞损伤的关系。方法:1.sFlt-1蛋白表达水平的测定:利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)定量地检测12例正常妊娠,12例轻度及12例重度子痫前期患者血清中sFlt-1的蛋白表达水平。2.肾小球血管内皮细胞的培养和鉴定:免疫组化检测因子Ⅷ,VEGF和CD31。3.肾小球血管内皮细胞单层屏障功能:在Transwell小室中分别用方法1中所述12例正常妊娠、12例轻度及重度子痫前期患者血清干预肾小球血管内皮细胞(human glomerular endothelial cell lines, GENC)的生长,用荧光标记的牛血清白蛋白检测肾小球血管内皮细胞的单层通透屏障功能。结果:1.子痫前期组血清中sFlt-1蛋白水平比正常妊娠组明显升高,重度子痫前期组血清中sFlt-1蛋白水平较轻度子痫前期组明显升高。2.子痫前期组血清可使肾小球血管内皮细胞功能明显受损,即肾小球血管内皮细胞的屏障功能受损,通过单层肾小球血管内皮细胞的牛血清白蛋白浓度升高,重度子痫前期组比轻度子痫前期组牛血清白蛋白浓度升高更明显,即肾小球血管内皮细胞受损程度更重,而外源性的VEGF则使通过单层肾小球血管内皮细胞的牛血清白蛋白浓度明显降低。3.肾小球血管内皮细胞功能受损程度与子痫前期组血清中sFlt-1蛋白水平成正相关。结论:子痫前期患者血清可使肾小球血管内皮细胞单层屏障的通透性增高,可能与患者血清中sFlt-1拮抗VEGF作用,使肾小球血管内皮细胞屏障功能受损有关。目的:研究外源性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)对滋养细胞sFlt-1过表达导致肾小球血管内皮细胞(GENC)损伤的影响,从细胞水平探讨sFlt-1与VEGF在肾小球血管内皮细胞损伤机制中的作用。方法:1.通过脂质体将sFlt-1/pcDNA3质粒转染到滋养细胞中,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)与实时定量多聚酶链反应(real-time polymerase chain reaction, Real-Time PCR)检测sFlt-1基因表达,ELISA法检测上清中sFlt-1蛋白表达。2.用转染组滋养细胞的上清干预肾小球血管内皮细胞,利用荧光标记的牛血清白蛋白检测肾小球血管内皮细胞的单层屏障功能。结果:1.通过脂质体将sFlt-1/pcDNA3质粒转染到滋养细胞中72h后,转染组中sFlt-1蛋白水平和基因水平的表达均明显增加。2.转染组上清干预肾小球血管内皮细胞功能明显受损:通过单层肾小球血管内皮细胞的牛血清白蛋白浓度明显升高,即肾小球血管内皮细胞的单层通透屏障功能明显受损,而加入外源性的VEGF使通过单层肾小球血管内皮细胞的牛血清白蛋白浓度明显降低。结论:外源性VEGF在维持肾小球内皮细胞功能方面有重要作用,滋养细胞中sFlt-1的过表达可导致肾小球血管内皮细胞功能明显受损,这可能是诱发子痫前期肾损伤一系列临床表现的重要原因。

全文目录

中文摘要  5-8
ABSTRACT  8-11
前言  11-17
  参考文献  14-17
第一部分子痫前期血清中 SFLT-1 水平变化特点及在肾小球血管内皮细胞损伤中的作用机制  17-31
  研究背景  17
  材料与方法  17-22
  结果  22-25
  讨论  25-28
  参考文献  28-31
第二部分外源性血管内皮生长因子对抗 SFLT-1 过表达导致肾小球血管内皮细胞损伤的机制研究  31-47
  研究背景  31
  材料和方法  31-40
  结果  40-43
  讨论  43-45
  参考文献  45-47
小结  47-49
致谢  49-50

sFlt-1与VEGF在肾小球血管内皮细胞损伤中作用机制的研究

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